塞來昔布對糖尿病胃輕癱大鼠胃排空的影響及其機制研究.pdf

1、糖尿病胃輕癱(diabetic gastroparesis，DGP)是糖尿病常見的消化道并發(fā)癥，隨著糖尿病發(fā)病率的增加，其發(fā)病率也將逐漸增加。目前DGP發(fā)病機制仍不十分明確，治療效果不盡人意，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，深入研究其發(fā)病機制和尋找新的治療方法顯得尤為重要。胃排空異常是DGP的重要病理生理特點，大量資料表明，花生四烯酸代謝通路與糖尿病及其并發(fā)癥有關(guān)，其中胃平滑肌環(huán)氧合酶-2（Cyclooxygenase-2， COX-2）及其產(chǎn)物

2、可能與胃排空有關(guān)，DGP胃排空異常是否與胃竇平滑肌COX-2有關(guān)，尚不清楚。
　　目的：探討塞來昔布（celecoxib）對糖尿病胃輕癱大鼠胃排空的影響及其可能的機制。
　　方法：雄性SD大鼠隨機分為實驗組和正常對照組。實驗組（n=14）一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ)50mg/kg后高糖高脂飼料喂食；正常對照組(normal control，NC組，n=7)腹腔注射等量磷酸鹽緩沖液并標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)

3、。8周后將實驗組大鼠隨機分為糖尿病胃輕癱組(DGP組， n=7)、塞來昔布組(CE組， n=7)；CE組灌胃塞來昔布40mg/(kg·d)共21天。半固體糊排空率法檢測大鼠胃排空；熒光定量PCR檢測胃竇平滑肌中COX-2和5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX) mRNA表達；Western blot及免疫組織化學(xué)法檢測胃竇平滑肌COX-2和5-LOX蛋白表達；酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorb

4、ent assay, ELISA)檢測前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)表達；透射電鏡觀察胃竇平滑肌細胞超微結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：
　　1. DGP大鼠半固體胃排空率較正常對照組顯著降低[(38.5±2.3)％vs(57.8±2.9)%,P<0.01]，CE組胃排空率顯著高于DGP組[(49.3±3.5)%vs(38.5±2.3)%,P<0.01]。
　　2.DGP大鼠胃竇平滑肌組織COX-2 mR

5、NA表達較正常對照組顯著升高(2.075±0.580 vs1.015±0.191,P<0.01)，CE組大鼠胃竇平滑肌組織COX-2 mRNA表達較DGP組顯著下降(1.108±0.210 vs2.075±0.580,P<0.01)。DGP大鼠胃竇平滑肌組織5-LOX mRNA表達較正常對照組顯著升高(4.414±0.843vs1.094±0.542,P<0.05)，CE組大鼠胃竇平滑肌組織5-LOXmRNA表達較DGP組顯著升高(10

6、.603±2.764vs4.414±0.843,P<0.01)。
　　3.免疫組化結(jié)果顯示胃竇平滑肌COX-2主要在胞漿和胞膜表達。DGP組大鼠胃竇平滑肌組織COX-2蛋白較正常對照組顯著升高(0.195±0.014 vs0.044±0.006,P<0.01)，CE組大鼠胃竇平滑肌組織COX-2蛋白表達較DGP組明顯下降(0.061±0.008 vs0.195±0.014,P<0.01)；5-LOX主要在胞漿和胞膜表達，DGP大鼠

7、胃竇平滑肌組織5-LOX蛋白表達較正常對照組顯著升高(0.083±0.029 vs0.033±0.006,P<0.05)， CE組大鼠胃竇平滑肌組織5-LOX蛋白表達較DGP組顯著升高(0.336±0.027 vs0.083±0.029,P<0.01)。
　　4.Western blot檢測顯示：DGP組大鼠胃竇平滑肌組織COX-2蛋白較正常對照組顯著升高(1.048±0.162 vs0.279±0.059,P<0.01)，CE組

8、大鼠胃竇平滑肌組織 COX-2蛋白表達較 DGP組顯著下降(0.411±0.154 vs1.048±0.162,P<0.01)；DGP大鼠胃竇平滑肌組織5-LOX蛋白表達較正常對照組顯著升高(0.121±0.009 vs0.061±0.018,P<0.05)，CE組大鼠胃竇平滑肌組織5-LOX蛋白表達較DGP組顯著升高(0.790±0.040 vs0.121±0.009,P<0.01)。
　　5. ELISA結(jié)果顯示：DGP組胃大

9、鼠竇平滑肌組織中PGE2表達較正常對照組顯著增加[(1984.3±163.2)pg/g tissuevs(860.4±95.4)pg/g tissue, P<0.01]。CE組胃竇平滑肌PGE2表達較DGP組顯著降低[(1330.5±182.5)pg/g tissuevs(1984.3±163.2)pg/g tissue,P<0.01]。
　　6.大鼠胃竇平滑肌超微結(jié)構(gòu)：正常大鼠胃竇平滑肌細胞一般呈梭形，細胞核比較規(guī)則，呈長橢圓形

10、，核膜相對平滑，肌絲、密斑及密體可見，線粒體較多。DGP組大鼠胃竇平滑肌細胞細胞核不規(guī)則，核膜皺縮明顯，線粒體腫脹、空泡化。CE組大鼠超微結(jié)構(gòu)得到改善，僅見少量髓鞘樣結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)論：
　　1.塞來昔布可顯著改善DGP大鼠胃排空延遲。
　　2. DGP發(fā)生與胃竇平滑肌COX-2/PGE2通路上調(diào)有關(guān)。
　　3.塞來昔布可下調(diào)DGP大鼠胃竇平滑肌COX-2/PGE2通路。
　　4. DGP大鼠胃竇平滑肌細胞超