檸條錦雞兒咖啡酰輔酶A-O-甲基轉移酶基因cDNA和gDNA全長克隆及生物信息學分析.pdf

1、木質素是植物次生細胞壁的主要組成成分，它是一種在地球上含量豐富程度僅次于纖維素的高分子有機聚合物。木質素對植物本身和人類的生產、生活都有著重要的影響。咖啡酰輔酶A-O-甲基轉移酶(CCoAOMT)是依賴S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的甲基轉移酶，在木質素生物合成過程中起到了重要的催化作用。
　　本研究利用RT-PCR和RACE技術首次從檸條錦雞兒中克隆得到了兩個編碼CCoAOMT的cDNA序列和一個 gDNA全序列，兩個 cDNA序列

2、分別命名為CkCCoAOMT-C和CkCCoAOMT-G，推測它們都屬于檸條錦雞兒CCoAOMT基因家族，gDNA序列包含5個外顯子和4個內含子。
　　生物信息學分析結果表明：CCoAOMT-C與CCoAOMT-G都應屬于親水性蛋白，其分子量分別約為28,012.12D和27,970.08D，理論等電點分別為5.55和5.54；兩個蛋白都由247個氨基酸殘基組成，但在第125和134位氨基酸殘基上存在差異，同樣兩者的二級結構和三級

3、結構也存在不同程度的差異。CkCCoAOMT-C和CkCCoAOMT-G都具有Methyltransf_3結構域和SAM結合位點，因此它們屬于O-甲基轉移酶家族。
　　針對CkCCoAOMT-C和CkCCoAOMT-G兩個基因構建過表達載體并轉化野生型擬南芥，經篩選分別得到3個 CkCCoAOMT-C轉基因純合體株系和6個CkCCoAOMT-G轉基因純合體株系。利用半定量RT-PCR檢測轉基因純合體植株中目的基因表達量，發(fā)現(xiàn)所有株