檸條錦雞兒咖啡酰輔酶A-O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因cDNA和gDNA全長(zhǎng)克隆及生物信息學(xué)分析.pdf

1、木質(zhì)素是植物次生細(xì)胞壁的主要組成成分，它是一種在地球上含量豐富程度僅次于纖維素的高分子有機(jī)聚合物。木質(zhì)素對(duì)植物本身和人類的生產(chǎn)、生活都有著重要的影響。咖啡酰輔酶A-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(CCoAOMT)是依賴S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的甲基轉(zhuǎn)移酶，在木質(zhì)素生物合成過(guò)程中起到了重要的催化作用。
　　本研究利用RT-PCR和RACE技術(shù)首次從檸條錦雞兒中克隆得到了兩個(gè)編碼CCoAOMT的cDNA序列和一個(gè) gDNA全序列，兩個(gè) cDNA序列

2、分別命名為CkCCoAOMT-C和CkCCoAOMT-G，推測(cè)它們都屬于檸條錦雞兒CCoAOMT基因家族，gDNA序列包含5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子。
　　生物信息學(xué)分析結(jié)果表明：CCoAOMT-C與CCoAOMT-G都應(yīng)屬于親水性蛋白，其分子量分別約為28,012.12D和27,970.08D，理論等電點(diǎn)分別為5.55和5.54；兩個(gè)蛋白都由247個(gè)氨基酸殘基組成，但在第125和134位氨基酸殘基上存在差異，同樣兩者的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)

3、結(jié)構(gòu)也存在不同程度的差異。CkCCoAOMT-C和CkCCoAOMT-G都具有Methyltransf_3結(jié)構(gòu)域和SAM結(jié)合位點(diǎn)，因此它們屬于O-甲基轉(zhuǎn)移酶家族。
　　針對(duì)CkCCoAOMT-C和CkCCoAOMT-G兩個(gè)基因構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化野生型擬南芥，經(jīng)篩選分別得到3個(gè) CkCCoAOMT-C轉(zhuǎn)基因純合體株系和6個(gè)CkCCoAOMT-G轉(zhuǎn)基因純合體株系。利用半定量RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因純合體植株中目的基因表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)所有株