胃癌組織中Kiss-1 mRNA與Notch1 mRNA的表達(dá)研究臨床意義.pdf

1、目的:胃癌是人類消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在世界范圍內(nèi)其發(fā)病呈上升趨勢(shì)。GLOBALCAN最新數(shù)據(jù)顯示，2012年全球新發(fā)胃癌病例95.1萬(wàn)，發(fā)病率占全球惡性腫瘤第五位，死亡率為第三位，其中男女發(fā)病率之比為2-3∶1。胃癌的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，目前公認(rèn)是由多基因多因素參與、環(huán)境和遺傳因素共同作用導(dǎo)致，而癌轉(zhuǎn)移是造成其預(yù)后差的重要原因。
　　Kiss-1基因最早在黑色素瘤細(xì)胞株中被發(fā)現(xiàn)，定位于染色體1q32-q41，編碼1個(gè)親水

2、性蛋白、包含4個(gè)外顯因子，其中親水蛋白由145個(gè)氨基酸組成。研究證實(shí)，Kiss-1基因是多種惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移抑制基因，腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后與Kiss-1基因的表達(dá)下調(diào)關(guān)系密切。Notch基因的發(fā)現(xiàn)最早是在果蠅體內(nèi)，其被首次克隆成功在1980年。目前，在哺乳動(dòng)物中共發(fā)現(xiàn)4種Notch受體(Notch1、Notch2、Notch3和Notch4)。研究表明，Notch1與多種腫瘤有密切關(guān)系，在腫瘤的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移中起重要的作用。目前，尚未闡明兩個(gè)基因

3、在胃癌發(fā)病過(guò)程中的作用。
　　本文應(yīng)用RT-qPCR(real-time quantitative reverse transcription-PCR，RT-qPCR)方法檢測(cè)胃癌組織及癌旁正常組織中Kiss-1 mRNA和Notch1mRNA表達(dá)情況，并經(jīng)過(guò)分析其與臨床病理特征（分化程度、轉(zhuǎn)移、分期、預(yù)后等）之間的關(guān)系，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中所起到的作用，為胃癌診治提供新的思路。
　　方法:
　　1、2013年1

4、0月～2014年10月期間，河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院經(jīng)病理證實(shí)胃癌住院手術(shù)患者34例，其中男性22例，女性12例，年齡49-83歲（平均年齡66.06±9.18歲），采集標(biāo)本前所有的患者均沒(méi)有進(jìn)行放療、化療，以及免疫治療。收集患者性別、年齡、TNM分期、腫瘤位置、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)狀態(tài)、浸潤(rùn)深度、分化程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床病理資料，登記建表并簽署知情同意書(shū)。分組情況:胃癌組34例標(biāo)本均取自手術(shù)切除的胃癌組織;正常對(duì)照組34例標(biāo)本均取自距腫瘤邊

5、緣5cm及以上的正常胃黏膜組織。34例標(biāo)本均在病理組織學(xué)診斷證實(shí)后最終選取。
　　2、TrizoL法提取34例胃癌組織及34例癌旁正常組織中的總RNA。
　　根據(jù)美國(guó)GeneCopoeia公司提供的反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。RT-qPCR檢測(cè)癌組織及癌周邊正常組織中的Kiss-1 mRNA、Notch1 mRNA的表達(dá)，引物購(gòu)自美國(guó)GeneCopoeia公司，按說(shuō)明書(shū)操作。反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性10 min，然后按9

6、5℃15s，60℃30s，72℃10s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，重復(fù)3次取平均值。本研究靶基因的表達(dá)量采用2-△CT表示，其中△CT為CT靶基因與CTGAPDH的差值。
　　3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示，兩組間配對(duì)樣本采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，兩組間獨(dú)立樣本采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、

7、Kiss-1 mRNA在胃癌組中的表達(dá)較正常對(duì)照組顯著降低，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2、Kiss-1 mRNA在胃癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期組中的表達(dá)顯著低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及TNM分期Ⅰ-Ⅱ期組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3、Notch1 mRNA在胃癌組中的表達(dá)較正常組顯著升高，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4、Notch1 mRNA在胃癌有淋

8、巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及TNM分期Ⅲ-Ⅳ期組中的表達(dá)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及Ⅰ-Ⅱ期組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5、Notch1 mRNA在胃癌低分化組的表達(dá)顯著高于高分化組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　6、Kiss-1 mRNA與Notch1 mRNA的表達(dá)均與患者性別、年齡、病理類型等無(wú)明顯相關(guān)性，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、Kiss-1 m

9、RNA在胃癌組織中的表達(dá)較癌旁正常組織顯著下調(diào)，提示其在胃癌發(fā)病過(guò)程中可能發(fā)揮抑癌作用。
　　2、Kiss-1 mRNA的表達(dá)與胃癌分期及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示其可能通過(guò)抑制胃癌的轉(zhuǎn)移來(lái)影響預(yù)后。
　　3、Notch1 mRNA在胃癌組織中的表達(dá)較癌旁正常組織顯著上調(diào)，提示其在胃癌發(fā)病過(guò)程中可能發(fā)揮促癌作用。
　　4、Notch1 mRNA的表達(dá)與胃癌的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及其分化程度密切相關(guān)，進(jìn)一步提示Notch1 mRNA