KiSS-1和MMP-9在胃癌及其癌前病變中的表達與臨床病理意義.pdf

1、中國醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學位論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我校或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關責任。論文作者簽名：至進日期：如糾一分門中國醫(yī)科大

2、學研究生學位論文版權使用授權書本人完全了解中國醫(yī)科大學有關保護知識產(chǎn)權的規(guī)定，即：研究生在攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權單位屬中國醫(yī)科大學。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學，且導師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學。學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借闋。學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內容(保密內容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文論文作者

3、簽名：至建全指導教師簽名：圭童日期：移過程中的作用。材料與方法臨床病理資料：收集中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院腫瘤外科手術切除胃癌標本164例，其中同時收集配對164例正常胃粘膜，42例慢性萎縮性胃炎，93例腸上皮化生以及15例異型增生。標本離體后盡快取材，lO％甲醛固定24h，取材組織厚4mln，常規(guī)組織處理、石蠟包埋，制成目標蠟塊，做4岬組織切片，用于目標組織定位。采用組織芯片制作儀將胃癌及其癌前病變以及配對正常胃粘膜等目標組織構建于組織

4、芯片蠟塊中，行4岬連續(xù)切片，備用。免疫組化染色與結果判定：用PV9000法檢測KiSS1及MMP9的表達情況。PV9000試劑盒購自北京中杉生物公司。KiSS1鼠抗人單克隆抗體(工作濃度1：300)購自美國Abnova公司，MMP9鼠抗人單克隆抗體(工作濃度：1：100)購自美國SantaCruz公司。采用檸檬酸修復液(pH6O)高壓修復抗原，PBS替代一抗做陰性對照。結果判定：KiSS1、MMP9免疫組化染色采用DAB顯色系統(tǒng)顯色，K

5、iSS1、MMP9蛋白陽性為棕黃色顆粒定位于細胞漿和／或細胞核。免疫組化結果由兩位觀察者采用盲法每個病例隨機選擇2個高倍視野，計數(shù)200個細胞，按照陽性細胞數(shù)占同類細胞數(shù)的比例，進行等級劃分。結果采用半定量計分方法，根據(jù)細胞染色強度㈧和染色細胞所占的比例(B)兩者乘積來判定。即：(A)：染色強度按下列標準評定記分：0分為無色；1分為淺黃色；2分為棕黃色；3分為棕褐色(B)：染色的陽性細胞占比例按下列標準評定記分：0分為陰性細胞或弱陽性細