基于Akt-mTOR信號通路的葉黃素對結(jié)腸癌HT29細胞增殖抑制作用的研究.pdf

1、目的：結(jié)腸癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，在胃腸道腫瘤中排名第二位。目前全世界每年新增結(jié)腸癌患者超過百萬人，結(jié)腸癌發(fā)病率高，其死亡率在腫瘤中排名第三位。近年來，隨著我國人民生活習慣的改變，結(jié)腸癌在我國的發(fā)病率正在迅速提高，其上升速度為每年4.1％，遠遠超過2%的國際水平，已嚴重威脅病人的生命。結(jié)腸癌的發(fā)生是一個多因素共同作用的結(jié)果，并且發(fā)病隱匿、迅速，患者生存周期較短。目前對結(jié)腸癌的治療手段主要是切除、化療和放療，治療手段單一，且效果并不

2、理想，病人術(shù)后易復(fù)發(fā)。因此，尋找一種新型、高效、低毒的天然植物藥物對于結(jié)腸癌的防治具有重要意義。
　　葉黃素主要存在于瓜果蔬菜中，是一種類胡蘿卜素。葉黃素具有預(yù)防白內(nèi)障，保護視力以及抗氧化的功能。同時，其在延緩動脈硬化以及抗腫瘤方面也存在著重要的作用。本實驗室前期實驗已證實：葉黃素在達到一定濃度之后，可顯著抑制胃癌、肝癌及食管癌細胞的增殖。本研究旨在探討葉黃素對人結(jié)腸癌HT29細胞的增殖抑制作用及其可能的作用機制。
　　方法

3、：采用SRB法繪制人結(jié)腸癌HT29細胞8 d的生長曲線；在HT29細胞培養(yǎng)液中加入不同濃度的葉黃素，分別于培養(yǎng)24、48、72 h后，采用SRB法檢測葉黃素對人結(jié)腸癌 HT29細胞增殖情況的影響；采用倒置顯微鏡觀察葉黃素對HT29細胞形態(tài)的影響；采用流式細胞儀檢測葉黃素對HT29細胞周期的影響；用不同濃度的葉黃素處理HT29細胞48 h后，采用Western blot檢測細胞內(nèi)AKT和 mTOR蛋白的磷酸化水平、eIF4E表達水平的變化

4、；采用 RT-PCR檢測細胞eIF4E mRNA表達的情況。
　　結(jié)果：SRB法檢測結(jié)果顯示，葉黃素能明顯抑制人結(jié)腸癌HT29細胞的增殖，并具有時間依賴性和劑量依賴性。濃度為40 mg/L的葉黃素作用HT29細胞24h、48 h和72 h后，其抑制率分別為12.04%，19.10%和33.50%。將葉黃素濃度增加到160 mg/L后，其抑制率分別提高到28.90%，61.76%和84.84%。流式細胞儀檢測HT29細胞周期結(jié)果顯示

5、，葉黃素作用HT29細胞48 h后，HT29細胞周期發(fā)生明顯阻滯，G0/G1期細胞比例大幅上升。Western blot檢測結(jié)果顯示，葉黃素作用HT29細胞48 h后，ATK蛋白的磷酸化水平降低，mTOR蛋白的磷酸化水平亦降低，eIF4E的表達水平下調(diào)，且均具有劑量依賴性。RT-PCR檢測結(jié)果表明，葉黃素作用HT29細胞48 h后，細胞內(nèi)eIF4E mRNA的表達下調(diào)，說明葉黃素可能影響eIF4E基因的轉(zhuǎn)錄和表達。
　　結(jié)論：葉黃