乙醛脫氫酶2通過調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激延緩動脈粥樣硬化進(jìn)展的研究.pdf

1、乙醛脫氫酶2(ALDH2)是人體內(nèi)代謝乙醛的關(guān)鍵酶，近年來大量研究表明ALDH2對心血管系統(tǒng)具有保護(hù)作用，可降低冠心病、高血壓、心功能不全的發(fā)生等，但具體機制尚不明確。
　　目的：
　　本研究分別從人群臨床研究及細(xì)胞基礎(chǔ)實驗兩個層次深入探討ALDH2在動脈粥樣硬化(AS)進(jìn)展中的作用，明確ALDH2延緩AS的作用機制。
　　方法：
　　在臨床研究中，納入解放軍總醫(yī)院心內(nèi)科擬診為冠心病的連續(xù)住院患者為受試者，共24

2、8例。根據(jù)ALDH2基因型檢測結(jié)果將患者分為2組:ALDH2野生型(ALDH2-wt)和ALDH2突變型(ALDH2-m)。收集患者基線臨床資料，記錄血脂水平(包括甘油三酯(TG)，總膽固醇(TC)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，載脂蛋白A1(apoA1)，載脂蛋白B(apoB))，超敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)，同型半胱氨酸(hcy)等化驗結(jié)果，根據(jù)冠狀動脈造影結(jié)果計算Gensini積分。采集患者血

3、液，收集上清，應(yīng)用ELISA法檢測4-羥基壬烯醛(4-HNE)含量。細(xì)胞水平實驗中，分離成年大鼠主動脈，提取并培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞，給予氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)150μg/ml模擬AS環(huán)境，分為正常對照組，ox-LDL組，Alda-1(ALDH2激活劑)+ox-LDL組，Daidzin(ALDH2抑制劑)+ox-LDL組。應(yīng)用Western blot方法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的蛋白，如葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)，蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激

4、酶(PERK)，磷酸化真核細(xì)胞翻譯起始因子(p-eIF2α)，轉(zhuǎn)錄激活因子4(ATF-4)，CEBP同源蛋白(CHOP)，4-羥基壬烯醛(4-HNE)等含量。流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)，TUNEL染色檢測凋亡的細(xì)胞比例，CCK-8檢測細(xì)胞活性。
　　結(jié)果：
　　1、共納入ALDH2-wt患者164例，ALDH2-m患者84例，兩組基線臨床資料中，ALDH2-wt組患者較ALDH2-m組相比，僅飲酒史差異有統(tǒng)計學(xué)意義(26.20％vs7.

5、10％，P＜0.001)，其他臨床指標(biāo)差異均無顯著性意義。
　　2、與ALDH2-wt組患者相比，ALDH2-m組患者的冠狀動脈支架植入總數(shù)(1.34±1.60 vs0.89±1.29，P＜0.05)以及冠狀動脈狹窄程度的Gensini積分(33.12±33.39 vs23.43±24.47，P＜0.05)均明顯增高。
　　3、Logistic回歸分析提示ALDH2突變型基因(OR=2.295)及高血壓病史(OR=3.241

6、)為冠心病的獨立危險因素。
　　4、ELISA結(jié)果顯示ALDH2-m組患者血清中4-HNE水平較ALDH2-wt組患者明顯升高(20.43±5.87 vs14.47±5.16，P＜0.05)。
　　5、細(xì)胞水平的Western blot結(jié)果顯示動脈平滑肌細(xì)胞中GRP78，PERK，p-eIF2α，ATF-4，CHOP,4-HNE蛋白水平在ox-LDL組表達(dá)明顯升高，而ALDH2激活劑Alda-1干預(yù)組中以上內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白

7、表達(dá)明顯降低，但是加入ALDH2抑制劑Daidzin后以上內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白較ox-LDL組明顯增高，存在疊加損傷效應(yīng)。
　　6、流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)、TUNEL、CCK-8檢測結(jié)果顯示oxLDL組的細(xì)胞凋亡比例明顯增加，Alda-1干預(yù)后凋亡細(xì)胞減少，增殖增加，經(jīng)Daidzin處理后凋亡細(xì)胞較oxLDL組明顯增加。
　　結(jié)論：
　　1、與ALDH2-wt患者相比，ALDH2-m組的冠狀動脈狹窄程度更為嚴(yán)重。
　　2、