左炔諾孕酮納米載藥緩釋復合材料對胚胎粘附及精子影響的實驗研究.pdf

1、目的和意義:
　　通過研究左炔諾孕酮納米載藥緩釋聚乳酸(PLA)-聚苯乙烯(PS)復合材料對體外胚胎粘附和精子形態(tài)與功能的影響，初步評價左炔諾孕酮納米載藥緩釋聚乳酸-聚苯乙烯生物材料的有效性和安全性，為左炔諾孕酮納米載藥緩釋復合材料可能作為一種安全有效的新型生物可降解納米載藥宮內(nèi)節(jié)育系統(tǒng)提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1、建立Ishikawa單層細胞（人子宮內(nèi)膜癌細胞）和Bewo細胞（人絨毛膜癌細胞）球狀體共培養(yǎng)模型。

2、
　　2、觀察左炔諾孕酮納米載藥緩釋復合材料對Bewo球狀體在Ishikawa單層細胞上的粘附和鋪展功能的影響:
　　(1)在共培養(yǎng)體系中分別加入空載藥膜緩釋液和載藥膜緩釋液，以未加膜緩釋液的共培養(yǎng)模型為空白對照組，計算Bewo球狀體在Ishikawa單層細胞上的粘附率及鋪展率;
　　(2)CCK8方法檢測空載藥膜和載藥膜對Ishikawa細胞增殖率的影響;
　　(3)Real time RT-PCR方法檢測各組

3、Ishikawa細胞整合素αv的mRNA表達改變。
　　3、觀察左炔諾孕酮納米載藥緩釋復合材料對人精子形態(tài)和功能的影響:
　　(1)經(jīng)密度梯度離心處理后正常生育男性精液分別與空載藥膜和載藥膜共培養(yǎng)，用計算機輔助精液分析(CASA)檢測精子活力;
　　(2)透射電鏡下觀察是空載藥膜組和載藥膜組精子形態(tài)的變化。
　　結(jié)果:
　　1、載藥膜組Bewo細胞球狀體的粘附率和平均鋪展直徑均降低，載藥膜組Ishikawa

4、細胞整合素αv的mRNA表達水平下降，同空載藥膜組和空白對照組相比差異均有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，空載藥膜組同空白對照組相比，差異均無顯著統(tǒng)計學意義(P＞0.05);
　　2、空載藥膜組、載藥膜組與空白對照組相比， Ishikawa細胞增殖率均無顯著的統(tǒng)計學差異(P＞0.05);
　　3、空白對照組、空載藥膜組和載藥膜組精子活力和活率差異無明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，空載藥膜組精子的超微結(jié)構(gòu)與空白對照組無明顯差別

5、;
　　4、載藥膜組精子的頂體波浪狀改變，頂體缺損或消失，質(zhì)膜溶解，線粒體空泡樣變，凋亡精子及崩解精子與空載膜組及對照組比較明顯增加。
　　結(jié)論:
　　1、聚乳酸-聚苯乙烯生物可降解材料（空載藥膜）不影響體外胚胎的粘附，不影響人子宮內(nèi)膜細胞的增殖，材料本身具有一定的生物安全性;
　　2、左炔諾孕酮納米載藥聚乳酸-聚苯乙烯緩釋復合材料（載藥膜）能夠抑制體外胚胎的粘附，具有明顯的抗著床作用;
　　3、聚乳酸-聚

6、苯乙烯生物可降解材料（空載藥膜）本身對人精子活力及精子超微結(jié)構(gòu)無明顯影響;
　　4、左炔諾孕酮納米載藥聚乳酸-聚苯乙烯緩釋復合材料（載藥膜）可使精子頂體缺損或消失，質(zhì)膜溶解，線粒體空泡樣變，引起精子裂解和凋亡，具有一定的精子殺傷作用;
　　5、本課題研究為左炔諾孕酮納米載藥聚乳酸-聚苯乙烯緩釋復合材料的生物安全性和有效性評價提供實驗依據(jù)，為左炔諾孕酮納米載藥聚乳酸(PLA)-聚苯乙烯(PS)復合材料可能成為新一代的宮內(nèi)節(jié)育系