常山酮治療小鼠早期骨性關(guān)節(jié)炎療效研究.pdf

1、目的：研究常山酮對(duì) ALCT切斷小鼠早期骨性關(guān)節(jié)炎模型的治療作用的試驗(yàn)研究。
　　方法：健康C57BL6J雄性小鼠90只，隨機(jī)分為一個(gè)月試驗(yàn)組和兩個(gè)月試驗(yàn)組，每組45只，然后再將其分為假手術(shù)組（sham組）、安慰劑組（ALCT+Vehicle組）、治療組（ALCT+Halofuginone組），每組15只，假手術(shù)組只打開(kāi)小鼠右膝關(guān)節(jié)囊不損傷其他部位，術(shù)后不做處理；其余兩組均為切斷小鼠右膝前交叉韌帶造骨性關(guān)節(jié)炎模型，一個(gè)月組的處理為

2、：安慰劑組術(shù)后第三天開(kāi)始給予蒸餾水隔天灌胃至30天；治療組術(shù)后第三天開(kāi)始按0.5mg/kg常山酮隔天灌胃至30天。蒸餾水和常山酮按照0.2ml的體積隔天灌藥一次，灌胃30天后處死；二個(gè)月組的處理為：安慰劑組術(shù)后第三天開(kāi)始給予蒸餾水按照0.2ml的體積隔天灌胃至30天，再靜養(yǎng)30天；治療組術(shù)后第三天開(kāi)始按0.5mg/kg的常山酮?jiǎng)┝颗涑?.2ml的體積隔天灌胃至30天，再靜養(yǎng)30天。期滿后處死后取下小鼠右膝關(guān)節(jié)，做HE染色和番紅固綠染色觀

3、察關(guān)節(jié)組織的形態(tài)和結(jié)構(gòu)；做免疫組織化學(xué)檢測(cè)關(guān)節(jié)軟骨中 TGF-β1、MMP-13、COLX蛋白的表達(dá)量；作免疫組化檢測(cè)軟骨下骨中的Psmad蛋白的表達(dá)量以及免疫組化檢測(cè)軟骨下骨中的成骨細(xì)胞標(biāo)記物Osterix和TRAP細(xì)胞數(shù)量。
　　結(jié)果：6組動(dòng)物全部存活至實(shí)驗(yàn)完成，切口愈合良好。組織學(xué)觀察，sham組：軟骨結(jié)構(gòu)正常，透明軟骨細(xì)胞排列整齊，分3層，第一層的軟骨細(xì)胞梭形，其長(zhǎng)軸水平排列；第二層圓形的軟骨細(xì)胞沒(méi)有規(guī)律的排列；第三層柱狀

4、排列的軟骨細(xì)胞與長(zhǎng)軸垂直。鈣化層的軟骨細(xì)胞明顯肥大。各層細(xì)胞間質(zhì)較多，無(wú)裂隙。ALCT+Vehicle組：排列紊亂的細(xì)胞在軟骨內(nèi)有著不均勻的細(xì)胞密度，表層明顯看到細(xì)胞密度增加或減少，在移行層也有類(lèi)似現(xiàn)象。關(guān)節(jié)軟骨層變薄且染色不均勻，軟骨層裂隙較多伴有碎裂現(xiàn)象；增值的軟骨細(xì)胞聚集成巢狀；ALCT+Halofuginone組：軟骨細(xì)胞分層清晰有序，細(xì)胞形態(tài)較規(guī)則，潮線明顯可見(jiàn)，軟骨鈣化層的細(xì)胞肥大。二個(gè)月組：sham組：關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)正常，細(xì)

5、胞排列整齊，軟骨細(xì)胞分層清晰有序，大致還是分3層，細(xì)胞形態(tài)較規(guī)則，潮線明顯可見(jiàn)，軟骨鈣化層的細(xì)胞肥大。ALCT+Vehicle組：排列紊亂的細(xì)胞在軟骨內(nèi)有著不均勻的細(xì)胞密度，表層明顯看到細(xì)胞密度增加或減少，在移行層也有類(lèi)似現(xiàn)象。軟骨層裂隙較多伴有碎裂現(xiàn)象；增值的軟骨細(xì)胞聚集成巢狀；ALCT+Halofuginone組：關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)基本正常，細(xì)胞排列較為整齊，軟骨細(xì)胞分層清晰有序，細(xì)胞形態(tài)較規(guī)則，軟骨鈣化層的細(xì)胞肥大，各軟骨層無(wú)明顯裂隙。

6、一個(gè)月組中 sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三組透明軟骨厚度/鈣化軟骨（HC/CC)分別為：(1.47±0.20)、（0.77±0.13）、（1.2±0.09）3組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；二個(gè)月組中sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三組透明軟骨厚度/鈣化軟骨（HC/CC)分別為：(1.24±0.25)、（0.58±0.15）、（1.04±0.11）；3組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、。一個(gè)月時(shí) sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone組 OARSI評(píng)分分別為（0.53±0.52）、（9.27±2.60）、（4.53±1.30）分，3組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；二個(gè)月時(shí)sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone組OARSI評(píng)分分別為（1.53±0.55）、（12.27±2.81）、（6.85±1.52）分，3組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。關(guān)節(jié)軟骨免疫組織化學(xué)染色觀察：一個(gè)月時(shí)，

8、sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三組關(guān)節(jié)軟骨中TGF-β1陽(yáng)性細(xì)胞/軟骨細(xì)胞分別為（0.054±0.013）、（0.239±0.032）、（0.157±0.029）分；3組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；二個(gè)月時(shí)，sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三組關(guān)節(jié)軟骨中 TGF-β1陽(yáng)性細(xì)胞/軟骨細(xì)胞分別為（0.069±0.018）、（0.331±0.041）、（0.213±0.026

9、）分；3組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。軟骨下骨免疫組織化學(xué)染色觀察：sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三組關(guān)節(jié)軟骨下骨中TRAP陽(yáng)性細(xì)胞/細(xì)胞分別為（18.33±1.43）、（109±11.16）、（35±2.83）分；3組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；sham、ALCT+Vehicle、ALCT+Halofuginone三組關(guān)節(jié)軟骨下骨中 Osterix陽(yáng)性細(xì)胞/細(xì)胞分別為（14.33±0.95）、（206±23.46）