母體孕期鎘暴露誘發(fā)胎兒神經管畸形和生長受限的機制.pdf

1、目的：此前的研究發(fā)現(xiàn)孕鼠在孕期GD9暴露鎘可致胎鼠前肢缺趾畸形和尾部畸形，本次實驗研究在胎兒神經管形成期對孕鼠進行鎘暴露是否會導致胎鼠神經管畸形并初步探討其部分機制。
　　方法：本次實驗主要包括以下三個實驗：實驗一：鎘致胎鼠神經管畸形模型：36只 ICR小鼠在受孕第8（GD8）天按體重隨機平均分為三組，于 GD8天8:00 a.m-9:00a.m通過腹腔注射分別給予0、2.5、5mg/kg的CdCl2。受孕期間三天稱量一次孕鼠體重

2、，每天記錄孕鼠飲食飲水量。GD18天進行取材，摘眼球法收集孕鼠血液，頸椎脫臼法處死并剖殺所有孕鼠，記錄活胎數(shù)、死胎數(shù)、畸形胎鼠數(shù)和吸收胎數(shù)，稱量活胎體重和胎盤重量，留取胎盤作病理切片觀察HE染色。
　　實驗二：研究孕鼠鎘暴露后對葉酸轉運的影響：24只ICR小鼠按體重在受孕第8（GD8）天按體重隨機分為兩組（對照組與鎘處理組），鎘處理組于GD8天8:00 a.m-9:00a.m單次腹腔注射5mg/kg的CdCl2，對照組給予生理鹽水

3、處理。24h后剖殺孕鼠，摘眼球法收集孕鼠血液，取胚胎和胎盤。血液室溫靜置2h左右3000轉離心10min留血清和胚胎一起-80℃保存用于檢測葉酸含量。
　　實驗三：研究孕鼠鎘暴露后對胎盤葉酸轉運泵的影響:48只ICR小鼠按體重在受孕第8（GD8）天按體重隨機分為8組。其中，鎘處理組于 GD8天8:00a.m-9:00a.m單次腹腔注射5mg/kg的CdCl2，對照組給予生理鹽水處理。鎘處理組孕鼠于鎘處理后不同時間點剖殺（2h、12

4、h、24h、48h、72h），對照組于0h、24h、48h、72h進行剖殺。摘眼球法收集孕鼠血液，取胎盤做RT-PCR和Western Blotting實驗檢測胎盤葉酸轉運泵水平。
　　結果：孕鼠孕期第8天暴露鎘可致胎鼠神經管畸形。其中2.5mg/kg鎘處理組的窩神經管畸形率為33.3%（4/12），平均胎鼠神經管畸形率為3.6%，5mg/kg鎘處理組的窩神經管畸形率高達75%（9/12），平均胎鼠神經管畸形率為20.0%，同時鎘

5、暴露可致胎鼠體重減少，母體孕期鎘暴露對胎鼠體重的減少呈劑量反應關系（劑量越高，胎鼠體重越輕）。此外，鎘暴露也會導致胎鼠身長明顯減少；并且孕鼠孕期鎘暴露會損害胎盤的發(fā)育，對胎盤重量的減少呈劑量反應關系（劑量越高，胎盤重量越輕）。相應的鎘暴露也會導致胎盤直徑明顯減少，對胎盤的病理HE染色發(fā)現(xiàn)，鎘處理組的胎盤迷路層血管明顯減少。我們進一步檢測了母體血清和胎鼠的葉酸水平，發(fā)現(xiàn)鎘處理組的胎盤葉酸水平明顯下降；此后，我們檢測了胎盤的葉酸轉運泵Pcf