尼古丁對舌鱗狀細胞癌增殖、遷移及侵襲的作用和初步機制研究.pdf

1、舌鱗狀細胞癌(TSCC)是頭頸部最常見的癌癥之一[1]，有文獻報道，2015年在美國新發(fā)的舌鱗狀細胞癌為14320例，死亡2190例。TSCC會嚴重影響患者的咀嚼、語言、外貌等功能，經(jīng)過手術(shù)放化療等綜合治療，TSCC患者的五年生存率仍只有50～70％。
　　有研究表明，吸煙為舌癌的重要危險因素之一，煙草濫用與TSCC的高發(fā)生率有關(guān)。然而，吸煙對舌癌發(fā)生的影響及機制卻仍不清楚。已有文獻報道煙草中的尼古丁能促進肺癌及食道癌細胞的增殖及

2、侵襲。但目前仍少有關(guān)于尼古丁對于TSCC影響的研究。所以，我們擬探索煙草中的尼古丁對于TSCC的作用及初步機制。
　　Wnt信號通路被證明與各種腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關(guān)。其中經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號通路與腫瘤細胞的增殖分化相關(guān)，而非經(jīng)典的Wnt/PCP信號通路與腫瘤細胞的極性及遷移相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，在舌癌標本中Wnt信號多個關(guān)鍵蛋白表達量升高，且與患者的生存率、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等預(yù)后密切相關(guān)。然而作為危險因素的吸煙與TSCC

3、中Wnt信號通路的異常激活是否有相關(guān)性仍研究較少。
　　研究的目的如下:1檢測在33例舌鱗狀細胞癌(TSCC)中，吸煙與TSCC標本中Wnt信號關(guān)鍵蛋白表達的相關(guān)性。2檢測煙草中的尼古丁在體外對舌鱗狀癌細胞系Cal27增殖遷移、侵襲能力的影響及其初步機制。
　　第一部分吸煙與舌癌標本W(wǎng)nt信號通路關(guān)鍵蛋白表達的相關(guān)性
　　目的:檢測在33例舌鱗狀細胞癌(TSCC)中，吸煙與Wnt信號通路關(guān)鍵蛋白表達(Wnt5a、Ror

4、2、β-catenin、c-jun)的相關(guān)性。
　　方法:采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，檢測33例舌鱗狀細胞癌(TSCC)中Wnt信號蛋白的表達情況，統(tǒng)計學(xué)分析與吸煙的相關(guān)性。
　　結(jié)果:IHC染色顯示，吸煙患者的腫瘤組織中的Wnt5a(IRS=5.58±2.32)和Ror2(IRS=6.05±2.13)明顯高于非吸煙者的Wnt5a(IRS=3.53±2.17)和Ror2(IRS=4.33±2.02)，且都具有統(tǒng)計學(xué)意義，（p=

5、0.013和p=0.019）。在吸煙組中，有89.47％的患者有β-catenin異常表達，但在非吸煙組只有53.33％(p=0.018)。另外c-Jun的表達與吸煙史無顯著相關(guān)性(IRS=4.53±2.01 vs.IRS=4.00±1.89,p=0.442)。
　　結(jié)論:TSCC標本中Wnt信號通路的關(guān)鍵蛋白β-catenin，Wnt5和Ror2的表達升高可能與吸煙有關(guān)，吸煙患者TSCC中Wnt信號通路可能存在異常激活。

6、　　第二部分尼古丁誘導(dǎo)舌鱗狀細胞系Cal27增殖、遷移、侵襲及Wnt通路激活
　　目的:檢測尼古丁在體外對Cal27增殖、遷移及侵襲能力的作用和對Wnt信號關(guān)鍵蛋白的影響。
　　方法:根據(jù)培養(yǎng)基中尼古丁濃度不同分為四組:對照組（DMSO組）、低濃度組(0.1 uM)、中濃度組(1 uM)、高濃度組(10 uM)。(1)以舌鱗癌細胞系Cal27為研究對像采用蛋白免疫印跡(Western blot)檢測β-catenin、c-M

7、yc、E-cadherin、p-GSK3b、Ror2、Wnt5a和c-jun的表達;(2) TOP/FOP熒光素報告系統(tǒng)，檢測β-catenin下游轉(zhuǎn)錄因子TCF的轉(zhuǎn)錄活性變化;(3)免疫熒光染色(IF)檢測β-catenin在細胞水平定位的變化;(4) CCK8細胞增殖實驗檢測尼古丁對舌鱗癌細胞系增殖能力的影響;(5)克隆形成實驗檢測尼古丁對舌鱗癌細胞系增殖能力的影響;(6)劃痕實驗檢測尼古丁對舌鱗癌細胞系遷移速度的影響。(7) Tr

8、answell小室細胞侵襲實驗檢測尼古丁對舌鱗癌細胞系侵襲能力的影響;(8)利用尼古丁受體α7 nAChR的特異性抑制劑α-BTX，明確尼古丁促進Cal27增殖、侵襲的影響及對Wnt信號蛋白的影響是否通過尼古丁受體。
　　結(jié)果:尼古丁在體外能夠濃度依賴性地促進Wnt/β-catenin和Wnt/PCP信號通路的激活;尼古丁能夠顯著提高Cal27的增殖活性，加快Cal27的遷移，增加Cal27的侵襲能力;上述作用需要尼古丁與尼古丁受