c-Kit對(duì)肝細(xì)胞癌增殖及侵襲性影響的初步研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文c-Kit對(duì)肝細(xì)胞癌增殖及侵襲性影響的初步研究姓名：蔡磊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師：董家鴻20090501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文M H C C 一9 7 H 中，利用R e a l t i m e ．P C R 及W e s t e m - b l o t 方法檢測(cè)其c —K i t 及K i t 的基因和蛋白表達(dá)，以明確其與侵襲、轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系；2 ．利用A d e a s y 系統(tǒng)，構(gòu)建

2、c ．K i t 重組腺病毒載體，用其轉(zhuǎn)染H e p ．G 2 肝癌細(xì)胞，通過w e s t e m - b l o t 、侵襲實(shí)驗(yàn)、運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)等方法，觀察過表達(dá)c ．Ⅺt 對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲、運(yùn)動(dòng)能力的影響；3 ．利用外源性的c ．Ⅺt 受體的配體S C F 添加入S M M C 一7 7 2 l 肝癌細(xì)胞，觀察c ．1 ( i t ／S C F 信號(hào)系統(tǒng)對(duì)對(duì)D ．c a t e n i n 分布情況的影響；并研究c ．K i

3、 t ／S C F 信號(hào)系統(tǒng)對(duì)p —c a t e n i n 分布情況的影響是否是通過P 1 3 剮A K T 信號(hào)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的，以及研究在此過程中P 1 3 ⅪA K T 信號(hào)系統(tǒng)中關(guān)鍵因子A l 訂，G S K 一3 p 磷酸化情況；4 ．通過免疫組化方法在8 9 例臨床肝細(xì)胞癌組織中檢測(cè)F A K 的表達(dá)，探討其與各臨床病理因素間的關(guān)聯(lián)，并通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析明確F A K 與c —l ( i t 的相關(guān)性；利用免疫共沉淀的方法，檢測(cè)s

4、 M M C 一7 7 2 1 和H e p —G 2 肝癌細(xì)胞中F A K 與K I T 蛋白的結(jié)合情況。結(jié)果及結(jié)論：1 ．在臨床H C C 組織標(biāo)本及不同侵襲、轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞中檢測(cè)c —K i t 表達(dá)，我們得出如下結(jié)果：1 ．1 ． c ．瞄t 的表達(dá)在肝細(xì)胞癌中顯著增高；1 ．2 ． c ．Ⅺt 的表達(dá)程度與腫瘤T N M 分期、血管侵襲、H B s A g 和H B V D N A 等臨床病理因素均呈顯著正相關(guān)，提示c 一

5、Ⅺt 表達(dá)與H C C 的進(jìn)展可能有密切關(guān)系，其表達(dá)隨著腫瘤的進(jìn)展而上調(diào)；1 ．3 ． 在同系中分離出的不同侵襲、轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞株中，高侵襲、轉(zhuǎn)移潛能的肝癌細(xì)胞株M H c c ．9 7 H 中c 一飚t 的表達(dá)明顯高于低侵襲、轉(zhuǎn)移潛能的M H c c 一9 7 L ，提示了c —l ( i t 的表達(dá)隨著腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移能力的增強(qiáng)而上調(diào)；2 ．成功構(gòu)建了攜帶c 一瞄t 基因的重組腺病毒載體，并能夠高效轉(zhuǎn)染H e p —G 2 肝癌細(xì)胞，

6、目的基因得到高表達(dá)；外源性轉(zhuǎn)染c ．1 ( i t 基因，可以提高H e p ．G 2 肝癌細(xì)胞的侵襲、運(yùn)動(dòng)能力。3 ．當(dāng)外源性的c —K i t 受體的配體S C F 添加入S M M C ．7 7 2 1 肝癌細(xì)胞后，P 1 3 列A K T信號(hào)系統(tǒng)被激活，其關(guān)鍵因子A K T 及G S K 一3 p 發(fā)生明顯的磷酸化，D —c a t e n i n 分布明顯向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，加入K r r ／S C F 信號(hào)通路的特異性抑制劑I