MiR-506對(duì)結(jié)直腸癌中NR4A1的表達(dá)調(diào)控及其意義的研究.pdf

1、MicroRNAs（miRNAs）屬于一類內(nèi)源性的非編碼RNA，其長度一般為18~25個(gè)核苷酸。第一個(gè)miRNA lin4由Dr.Victor R.Ambros于1993年在線蟲中發(fā)現(xiàn)，并且經(jīng)證明與線蟲的發(fā)育有關(guān)。隨著越來越多的miRNA被發(fā)現(xiàn)，其功能也逐漸被發(fā)掘，并且組成了一個(gè)龐大的小分子調(diào)控RNA家族。研究表明，超過60％的哺乳動(dòng)物基因表達(dá)受到miRNA的調(diào)控，它們主要涉及基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié)，進(jìn)而參與到各種各樣的細(xì)胞生理及病理過程

2、，例如細(xì)胞的增殖、凋亡和分化，以及癌癥的發(fā)生等。NR4A1（又稱Nur77、TR3、NGFIB）為NR4A孤兒核受體超家族的成員之一，它是一種“即早基因”，可被多種因素，如激素、生長因子、炎癥因子等快速誘導(dǎo)表達(dá)，并且在細(xì)胞的增殖、凋亡、血管重塑、炎癥反應(yīng)、糖脂代謝和腫瘤的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。NR4A1在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)作用較為復(fù)雜，它既可作為癌基因促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制凋亡；又可作為抑癌基因表現(xiàn)出抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡的作用。NR4A

3、1這種對(duì)腫瘤細(xì)胞生存的雙重調(diào)節(jié)作用主要與細(xì)胞類型、細(xì)胞微環(huán)境及NR4A1的亞細(xì)胞定位有關(guān)。研究證實(shí)NR4A1在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)增加，并且可以促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖與遷移。我們利用在線生物數(shù)據(jù)庫TargetScan對(duì)NR4A1的3’-UTR（563bp）進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在NR4A13’-UTR第52-58bp上存在miR-506的作用位點(diǎn)。并且miR-506在人類、黑猩猩、恒河猴等高級(jí)靈長類物種以及齲齒類動(dòng)物中高度保守，都可以和相應(yīng)物

4、種NR4A1基因的3’-UTR互補(bǔ)配對(duì)。提示miR-506對(duì)NR4A1可能具有調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而參與了NR4A1對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的調(diào)控過程。因此，本研究旨在探討在結(jié)直腸癌中，miR-506對(duì)NR4A1的表達(dá)調(diào)控及其生物學(xué)意義，以期為結(jié)直腸癌提供新的治療靶點(diǎn)。
　　我們首先運(yùn)用qRT-PCR和Western Blotting檢測(cè)結(jié)直腸癌組織和結(jié)直腸癌細(xì)胞中miR-506和NR4A1的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)miR-506在結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞中表

5、達(dá)降低，NR4A1的mRNA和蛋白表達(dá)水平升高。利用Spearman相關(guān)分析方法，顯示結(jié)直腸癌組織中NR4A1的mRNA表達(dá)與miR-506的水平呈明顯負(fù)相關(guān)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)miR-506mimic可以明顯降低NR4A1 mRNA和蛋白表達(dá)水平，miR-506 inhibitor對(duì)NR4A1 mRNA的水平?jīng)]有影響，但可以顯著增加NR4A1的蛋白表達(dá)。3’-UTR雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果表明，miR-506 mimic可以降低野生

6、型NR4A13’-UTR的活性，而對(duì)miR-506作用位點(diǎn)發(fā)生突變的3’-UTR活性沒有影響，提示miR-506是通過直接靶向NR4A1的3’-UTR而下調(diào)NR4A1的表達(dá)。為了進(jìn)一步闡明miR-506以及NR4A1在結(jié)直腸癌中的生物學(xué)功能，我們最后分別采用MTT、流式細(xì)胞術(shù)及transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)miR-506和NR4A1對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-506或降低NR4A1的表達(dá)，均可抑制