幽門螺桿菌感染的檢測及遺傳易感性研究.pdf

1、目的：
　　幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，H.pylori）感染是人類最常見的慢性感染之一，也是公認的引起人類慢性胃炎、消化性潰瘍、胃癌等疾病的病因之一。H.pylori感染可能與宿主的年齡、性別、種族、遺傳因素、地理位置及社會經(jīng)濟狀況相關(guān)。WHO將H.pylori列為第1類致病因子。因此快速準確地檢測H.pylori感染對人類健康具有重要意義。本研究建立一種新的熒光定量PCR（FQ-PCR）方法，檢測不同炎

2、癥程度胃炎患者胃粘膜H.pylori，并與石碳酸復紅-孔雀綠染色法結(jié)果進行對比，探討H.pylori感染與胃炎炎癥程度的相關(guān)性及FQ-PCR法檢測H.pylori感染對臨床診斷治療的意義。研究toll樣受體1（TLR1）基因編碼區(qū)rs4833095位點和TLR10啟動子區(qū)rs10004195位點基因多態(tài)性，分析中國漢族人群上述SNP位點等位基因及基因型分布特點，探討其基因多態(tài)性與H.pylori感染的相關(guān)性，明確H.pylori感染的遺

3、傳易感因素。
　　方法：
　　1.納入234例行胃鏡檢查的輕、中、重度胃炎患者，于胃竇部取胃粘膜組織2塊，1塊用于提取粘膜組織DNA，應用FQ-PCR方法定量檢測H.pylori；另外1塊用于常規(guī)H-E染色檢測組織病理學改變及石碳酸復紅-孔雀綠染色法檢測H.pylori。
　　2.選取13C-尿素呼氣試驗確診的H.pylori陽性與陰性病例，抽取外周血2ml，提取全血DNA，應用普通PCR法擴增TLR1rs483309

4、5位點和TLR10rs10004195位點基因序列，應用直接測序方法檢測上述SNP位點基因型。
　　結(jié)果：
　　1.FQ-PCR法H.pylori檢出率明顯高于石碳酸復紅-孔雀綠染色法，能夠檢測到染色法無法檢測到的低水平H.pylori。234份標本中采用FQ-PCR方法檢出H.pylori陽性136例（58.1％），石碳酸復紅-孔雀綠染色法檢出H.pylori陽性104例（44.4％）；經(jīng)配對χ2檢驗，兩種方法檢測H.py

5、lori陽性率之間的差異有統(tǒng)計學意義（χ2=23.273，P<0.001）。136例FQ-PCR法檢測陽性標本中，染色法檢測陽性98例，陰性38例，H.pylori細菌數(shù)log值分別為9.09±1.75、7.28±1.91；經(jīng)獨立樣本t檢驗，2組細菌數(shù)之間的差異有統(tǒng)計學意義（t=5.275，P<0.001）。
　　2.不同炎癥程度胃炎胃粘膜H.pylori陽性率及細菌數(shù)量有差異。采用FQ-PCR法檢測輕度、中度及重度胃炎的H.py

6、lori陽性率分別為52.9%（36/68）、51.6%（48/93）及71.2%（52/73），經(jīng)χ2檢驗，3組陽性率之間的差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.524，P=0.023）。采用四格表χ2檢驗兩兩比較，其中重度胃炎組H.pylori陽性率明顯高于輕、中度胃炎組（χ2=5.021、6.573，P=0.025、0.010）。136例陽性標本中，輕、中、重度胃炎分別為36、48、52例，H.pylori細菌數(shù)log值分別為7.08±2.

7、19、8.41±2.23、8.76±1.37；經(jīng)單因素方差分析，3組細菌數(shù)之間的差異有統(tǒng)計學意義（F=8.50，P<0.001）；采用LSD法組內(nèi)兩兩比較，其中輕度胃炎組H.pylori細菌數(shù)明顯低于中、重度胃炎組（P均<0.01）。
　　3.在漢族人群中，TLR1rs4833095位點和TLR10rs10004195位點基因呈現(xiàn)多態(tài)性。TLR1rs4833095位點基因型有GG純合型、GA雜合型、AA純合型三種，頻率分別為41.

8、0%、46.0%、13.0%。G為TLR1rs4833095位點的主要等位基因，A為次要等位基因。TLR10rs10004195位點基因型有TT純合型、TA雜合型、AA純合型三種，頻率分別為30.3%、47.0%、22.7%。T為TLR10rs10004195位點的主要等位基因，A為次要等位基因。上述SNP位點基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，具有群體代表性（χ2=0.001、0.143，P=0.999、0.565）。

9、r>　　4.TLR1rs4833095位點和TLR10rs10004195位點基因多態(tài)性與H.pylori感染相關(guān)。H.pylori陽性組TLR1rs4833095位點包含G等位基因的基因型（GG+GA型）頻率為83.5%，不包含G的基因型（AA型）為16.5%，H.pylori陰性組分別為90.5%、9.5%。H.pylori陽性組AA純合型頻率明顯高于H.pylori陰性組（16.5%vs.9.5%），差異有統(tǒng)計學意義（OR=1.8

10、8，95%CI：1.03-3.44，χ2=4.332，P=0.037）；位點G等位基因在H.pylori陽性組及H.pylori陰性組的頻率分別為62.0%和66.0%，A等位基因分別為38.0%和34.0%，經(jīng)χ2檢驗，兩組的等位基因頻率差異無統(tǒng)計學意義（OR=1.19，95%CI：0.89-1.59，χ2=1.389，P=0.239）。H.pylori陽性組TLR10rs10004195位點包含T等位基因的基因型（TT+TA型）頻率

11、為73.1%，不包含T的基因型（AA型）為26.9%，H.pylori陰性組分別為81.9%、18.1%。同樣，H.pylori陽性組AA純和型頻率明顯高于H.pylori陰性組（26.9%vs.18.1%），差異有統(tǒng)計學意義（OR=1.66，95%CI：1.02-2.71，χ2=4.150，P=0.042）；T等位基因在H.pylori陽性組及H.pylori陰性組的頻率分別為51.5%和56.3%，A等位基因分別為48.5%和43.

12、7%，經(jīng)χ2檢驗，兩組的等位基因頻率差異無統(tǒng)計學意義（OR=1.22，95%CI：0.91-1.62，χ2=1.790，P=0.181）。
　　結(jié)論：
　　1.建立了定量檢測H.pylori的FQ-PCR法，能夠準確檢測組織學染色無法檢測到的低水平H.pylori，對確診胃鏡活檢標本中H.pylori感染并指導治療具有重要應用價值。
　　2.慢性胃炎的炎癥程度與H.pylori細菌數(shù)量相關(guān)。
　　3.中國漢族人群