預(yù)防幽門螺桿菌感染的蛋黃抗體的研制.pdf

1、目的：采用基因工程技術(shù)大量表達重組幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，H．pylori)鞭毛粘附素(HpaA)，用此重組蛋白作為抗原，制備高效價的抗HpaA的雞蛋黃抗體IgY，為研制H．pylori預(yù)防性抗體制劑奠定基礎(chǔ)。 方法： 1．誘導(dǎo)重組質(zhì)粒pQE30-hpaA在大腸桿菌DH5a中表達rHpaA，SDS-PAGE分析其表達形式。 2．重組蛋白經(jīng)Ni2+-NTA樹脂純化后，采用Bradford法

2、測定蛋白濃度。 3．用rHpaA免疫30周齡立克體雞，以水稀釋法聯(lián)合鹽析法提取HpaA-IgY，純化濃縮后用Bradford法測定其含量，SDS-PAGE電泳檢測純度，Westernblot鑒定抗原特異性。 4．ELISA測定效價和巴氏消毒后的活性。 結(jié)果： 1．SDS-PAGE電泳顯示pQE30-hpaA-DH5a表達產(chǎn)物相對分子量為30000。 2．SDS-PAGE分析表達形式，rHpaA主要

3、存在于細菌裂解液上清中，約占70％，部分存在于包涵體中，經(jīng)Ni2+_NTA樹脂對上清進行純化后，純度約為90％，Bradford法測得蛋白質(zhì)含量為0．95mg/ml。 3．HpaA-IgY提純后，Bradford法測得含量為24．6mg/m1，純度約為90％，Westernblot顯示在相對分子量30000處出現(xiàn)單一條帶，ELISA效價為l：l2800。 4．巴氏消毒后未見效價損失。 結(jié)論：成功獲得了高濃度、高純