HDAC2調(diào)控NR2B-HGN表達(dá)在孕早期母體丙泊酚暴露致SD大鼠子代學(xué)習(xí)記憶損害中的作用.pdf

1、目的：
　　探討HDAC2調(diào)控NR2B/HGN表達(dá)平衡在孕早期母體丙泊酚暴露致SD大鼠子代學(xué)習(xí)記憶損害中的作用。
　　方法：
　　選擇清潔級(jí)孕5-7天、月齡9周的SD大鼠30只，體重260-310 g，用隨機(jī)數(shù)表法隨機(jī)分為丙泊酚麻醉組（P組），生理鹽水對(duì)照組（C組）和脂肪乳劑對(duì)照組（I組）。于孕5-7天，P組母鼠以20 mg/kg丙泊酚靜脈注射進(jìn)行麻醉誘導(dǎo)，然后以20 mg·kg-1·h-1的速率靜脈持續(xù)輸注4 h；C

2、組母鼠給予等容量（2 ml/kg）生理鹽水，I組母鼠給予等容量（2 ml/kg）脂肪乳劑。各組子鼠出生后隨機(jī)分為SAHA亞組、SEN亞組、HGN亞組、DMSO亞組、NS亞組和HGN對(duì)照亞組。各組子鼠分別腹腔注射HDAC抑制劑SAHA（90 mg/kg）、遠(yuǎn)志皂苷元（Senegenin）（15 mg/kg），海馬注射HGN反義核苷酸（0.25 nmol/μl,1.5μl），相應(yīng)對(duì)照組分別腹腔注射等量溶媒DMSO、生理鹽水，以及海馬注射1.

3、5?μl生理鹽水，然后對(duì)子鼠的學(xué)習(xí)記憶功能進(jìn)行測(cè)定。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取子鼠海馬組織，采用免疫熒光法檢測(cè)HDAC2、磷酸化CREB（P-CREB）蛋白表達(dá)水平，用免疫印跡法測(cè)定海馬組織乙?；M蛋白 H3K14和 H4K12、NR2B、HGN和突觸小泡蛋白（Synaptophysin）的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　（1）學(xué)習(xí)記憶功能結(jié)果：1）對(duì)照組結(jié)果：生理鹽水對(duì)照組各溶媒亞組子鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.

4、05）。脂肪乳劑對(duì)照組 NS亞組（IN）與生理鹽水對(duì)照組 NS亞組（CN）子鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；2）丙泊酚麻醉后結(jié)果：丙泊酚麻醉NS亞組（PN）較生理鹽水對(duì)照組NS亞組（CN）和脂肪乳劑對(duì)照組NS亞組（IN）第5、6天逃避潛伏期均延長(zhǎng)，穿越平臺(tái)次數(shù)均減少（P＜0.05）。3）SAHA處理后結(jié)果：丙泊酚麻醉 SAHA亞組（PA）與丙泊酚麻醉 NS亞組（PN）子鼠比較，第5、6天逃避潛伏期縮短，穿越平臺(tái)次

5、數(shù)增加（P＜0.05）。丙泊酚麻醉SAHA亞組（PA）子鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)與生理鹽水SAHA亞組（CA）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。生理鹽水SAHA亞組（CA）與生理鹽水NS亞組（CN）比較子鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ P＞0.05）。4）遠(yuǎn)志皂苷元（Senegenin）處理后結(jié)果：丙泊酚麻醉SEN亞組（PS）與丙泊酚麻醉NS亞組（PN）子鼠比較，第5、6天逃避潛伏期縮短，穿越平臺(tái)次數(shù)增加（P＜0.05）

6、，丙泊酚麻醉SEN亞組（PS）與生理鹽水SEN亞組（CS）比較第4天逃避潛伏期延長(zhǎng)（P＜0.05），穿越平臺(tái)次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。生理鹽水 SEN亞組（CS）與生理鹽水NS亞組（CN）比較子鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。5）HGN反義核苷酸處理后結(jié)果：丙泊酚麻醉HGN亞組（PH）與丙泊酚麻醉NS亞組（PN）子鼠比較，第5、6天逃避潛伏期縮短，穿越平臺(tái)次數(shù)增加（P＜0.05）。丙泊酚麻醉HGN亞組（P

7、H）子鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)與生理鹽水HGN亞組（CH）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。生理鹽水HGN亞組（CH）與生理鹽水NS亞組（CN）比較子鼠逃避潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　（2）與學(xué)習(xí)記憶相關(guān)蛋白表達(dá)結(jié)果：丙泊酚麻醉NS亞組（PN）與生理鹽水NS亞組（CN）比較，子代大鼠海馬區(qū)HDAC2蛋白和HGN蛋白表達(dá)增加，乙?；M蛋白H3K14和H4K12、P-CREB、Synaptophysi

8、n和NR2B蛋白表達(dá)均減少，NR2B/HGN比值下降（P＜0.05）；丙泊酚麻醉SAHA亞組（PA）、SEN亞組（PS）和HGNA亞組（PH）與丙泊酚麻醉NS亞組（PN）比較，子代大鼠海馬區(qū)HDAC2蛋白和HGN蛋白表達(dá)水平均減少，乙酰化組蛋白H3K14和H4K12、P-CREB、Synaptophysin和 NR2B蛋白表達(dá)均增加， NR2B/HGN比值升高（P＞0.05）。丙泊酚麻醉SAHA亞組（PA）、SEN亞組（PS）和HGNA

9、亞組（PH）與生理鹽水NS亞組（CN）比較，上述指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　孕早期丙泊酚暴露對(duì)SD大鼠子代學(xué)習(xí)記憶功能有明顯損害作用，其機(jī)制可能與上調(diào)子代大鼠海馬區(qū)HDAC2蛋白表達(dá)，影響組蛋白的乙酰化和CREB蛋白的磷酸化，下調(diào)突觸小泡蛋白和NR2B蛋白的表達(dá)，上調(diào)HGN蛋白表達(dá)，進(jìn)而破壞 NR2B/HGN表達(dá)平衡有關(guān)，即孕早期母體丙泊酚暴露通過(guò)“HDAC2-CREB-NR2B”通路破壞NR2B/HGN表達(dá)平