棘白菌素B脫酰基酶的重組表達(dá)及生物轉(zhuǎn)化棘白菌素B的研究.pdf

1、棘白菌素B（EchinocandinB，ECB）脫?；甘侵苽浼拙谺母核(Echinocandin B Nucleus，ECBN)的關(guān)鍵酶。ECBN主要通過(guò)ECB脫酰基酶催化ECB獲得。目前ECB脫?；复嬖诒磉_(dá)量低，催化效率不高等問(wèn)題，無(wú)法滿足工業(yè)化生產(chǎn)。本論文通過(guò)將實(shí)驗(yàn)室保藏的重組質(zhì)粒pSET152-ecbD導(dǎo)入變鉛青鏈霉菌（Streptomyces lividans）TK24，并對(duì)介質(zhì)催化ECB的工藝研究，主要研究結(jié)果如下:<

2、br>　　首先將重組質(zhì)粒pSET152-ecbD通過(guò)E.coli ET12567/pUZ8002-鏈霉菌接合轉(zhuǎn)移導(dǎo)入變鉛青鏈霉菌中，菌落PCR檢測(cè)陽(yáng)性重組子，催化反應(yīng)驗(yàn)證篩選得到產(chǎn)ECB脫?；傅闹亟M菌變鉛青鏈霉菌S.L152-1-6，粗酶液酶活是243U/L，是前期構(gòu)建的天藍(lán)鏈霉菌重組菌表達(dá)酶活力的2.27倍。將重組質(zhì)粒pUC19-ecb導(dǎo)入大腸桿菌E.coliBL21，初步探索ECB脫?；冈诖竽c中的表達(dá)，研究結(jié)果表明ECB脫?；?/p>

3、在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)可溶性表達(dá)，底物濃度0.2g/L。反應(yīng)10h后，轉(zhuǎn)化率為20.1％。
　　研究了ECB脫?；冈谥軇w系中生物轉(zhuǎn)化ECB的過(guò)程，確定了甲醇為最佳助溶劑，研究結(jié)果表明，底物濃度為0.5g/L，甲醇添加量為9％(v/v)，pH6.5，溫度35℃，反應(yīng)9h，ECB轉(zhuǎn)化率達(dá)到75.3％，是對(duì)照組的1.83倍。在反應(yīng)體系中，底物濃度為0.7g/L時(shí)，將會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的底物抑制，使酶活力下降。
　　為了解除底物ECB的抑制