SEC-10在線蟲(chóng)細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)途徑中的功能研究.pdf

1、Exocyst復(fù)合物是由SEC-3，SEC-5，SEC-6，SEC-8，SEC-10，SEC-15，EXO-70和EXO-84共8種亞基蛋白組成一種蛋白質(zhì)復(fù)合物，它在細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)中起著重要的作用。目前人們認(rèn)為exocyst復(fù)合物主要作用于囊泡和膜結(jié)構(gòu)融合之前的栓系（tethering）過(guò)程，以及囊泡從高爾基體分泌之后被轉(zhuǎn)運(yùn)到膜附近的過(guò)程，但是對(duì)于其具體分子機(jī)制尚無(wú)法完全闡明。此外還有報(bào)道exocyst復(fù)合物的蛋白組分SEC-5，SE

2、C-8在胞吞中行使功能。為了更加清晰的了解exocyst復(fù)合物的作用機(jī)理，以及探尋該復(fù)合物是否還存在其他未知的功能，我們針對(duì)exocyst復(fù)合物的蛋白組分SEC-10開(kāi)展了研究。
　　 線蟲(chóng)作為模式生物在諸多方面存在著不可比擬的優(yōu)勢(shì)，所以我們選取它作為研究的平臺(tái)。我們首先構(gòu)建完成了國(guó)內(nèi)首個(gè)高通量線蟲(chóng)突變基因庫(kù)，通過(guò)對(duì)該突變基因庫(kù)進(jìn)行篩選，我們成功得到sec-10基因突變的線蟲(chóng)種系。我們發(fā)現(xiàn)sec-10基因的缺失引起了線蟲(chóng)的多種缺

3、陷表型，而且sec-10基因也廣泛地在線蟲(chóng)體內(nèi)表達(dá)。我們分別針對(duì)了神經(jīng)肌肉接頭處的信號(hào)傳遞，腔胞的胞吞以及產(chǎn)卵這三個(gè)方面進(jìn)行了研究。神經(jīng)肌肉接頭處的電生理數(shù)據(jù)顯示sec-10基因的缺失對(duì)于目前已經(jīng)報(bào)道過(guò)的突觸后三種離子型受體均不存在影響，而且也未干擾突觸前的囊泡自發(fā)性分泌。但是藥學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果卻能夠推論出sec-10基因突變種系的突觸后膜上受體過(guò)度敏感，我們推測(cè)是由于突觸后膜上離子型受體以外的其他類型受體受到了影響。通過(guò)GFP吸收實(shí)驗(yàn)，我

4、們發(fā)現(xiàn)sec-10基因突變種系的腔胞存在明顯的胞吞缺陷，而肌肉分泌GFP完全正常，成像結(jié)果顯示sec-10基因的缺失嚴(yán)重影響了Clathrin依賴的胞吞途徑相關(guān)分子的定位和形態(tài)，但是sec-10基因突變種系的腔胞中早期內(nèi)涵體，晚期內(nèi)涵體，溶酶體以及高爾基體的形態(tài)和分布均正常，而且rhodamin-dextran在胞內(nèi)的定位也和野生型基本一致，因此推測(cè)該突變體Clathrin依賴的胞吞途徑受阻，而腔胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程未產(chǎn)生明顯改變。最后對(duì)于產(chǎn)卵