SEC-10在線蟲細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)途徑中的功能研究.pdf

1、Exocyst復(fù)合物是由SEC-3，SEC-5，SEC-6，SEC-8，SEC-10，SEC-15，EXO-70和EXO-84共8種亞基蛋白組成一種蛋白質(zhì)復(fù)合物，它在細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)中起著重要的作用。目前人們認(rèn)為exocyst復(fù)合物主要作用于囊泡和膜結(jié)構(gòu)融合之前的栓系（tethering）過程，以及囊泡從高爾基體分泌之后被轉(zhuǎn)運(yùn)到膜附近的過程，但是對于其具體分子機(jī)制尚無法完全闡明。此外還有報(bào)道exocyst復(fù)合物的蛋白組分SEC-5，SE

2、C-8在胞吞中行使功能。為了更加清晰的了解exocyst復(fù)合物的作用機(jī)理，以及探尋該復(fù)合物是否還存在其他未知的功能，我們針對exocyst復(fù)合物的蛋白組分SEC-10開展了研究。
　　 線蟲作為模式生物在諸多方面存在著不可比擬的優(yōu)勢，所以我們選取它作為研究的平臺(tái)。我們首先構(gòu)建完成了國內(nèi)首個(gè)高通量線蟲突變基因庫，通過對該突變基因庫進(jìn)行篩選，我們成功得到sec-10基因突變的線蟲種系。我們發(fā)現(xiàn)sec-10基因的缺失引起了線蟲的多種缺

3、陷表型，而且sec-10基因也廣泛地在線蟲體內(nèi)表達(dá)。我們分別針對了神經(jīng)肌肉接頭處的信號傳遞，腔胞的胞吞以及產(chǎn)卵這三個(gè)方面進(jìn)行了研究。神經(jīng)肌肉接頭處的電生理數(shù)據(jù)顯示sec-10基因的缺失對于目前已經(jīng)報(bào)道過的突觸后三種離子型受體均不存在影響，而且也未干擾突觸前的囊泡自發(fā)性分泌。但是藥學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果卻能夠推論出sec-10基因突變種系的突觸后膜上受體過度敏感，我們推測是由于突觸后膜上離子型受體以外的其他類型受體受到了影響。通過GFP吸收實(shí)驗(yàn)，我

4、們發(fā)現(xiàn)sec-10基因突變種系的腔胞存在明顯的胞吞缺陷，而肌肉分泌GFP完全正常，成像結(jié)果顯示sec-10基因的缺失嚴(yán)重影響了Clathrin依賴的胞吞途徑相關(guān)分子的定位和形態(tài)，但是sec-10基因突變種系的腔胞中早期內(nèi)涵體，晚期內(nèi)涵體，溶酶體以及高爾基體的形態(tài)和分布均正常，而且rhodamin-dextran在胞內(nèi)的定位也和野生型基本一致，因此推測該突變體Clathrin依賴的胞吞途徑受阻，而腔胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過程未產(chǎn)生明顯改變。最后對于產(chǎn)卵