ⅰ.小金海棠mxirt1的離子轉(zhuǎn)運、細胞定位與降解途徑研究;ⅱ.水稻osnat7的底物轉(zhuǎn)運功能研究

1、首都師范大學(xué)博士學(xué)位論文Ⅰ.小金海棠MxIRT1的離子轉(zhuǎn)運、細胞定位與降解途徑研究;Ⅱ.水稻OsNAT7的底物轉(zhuǎn)運功能研究姓名：李鵬申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：印莉萍20080520但對C d 的轉(zhuǎn)運作川并不必要。這一結(jié)果與C o n n o l l y 實驗室點突變的結(jié)果不一致，推測這一基序的二級結(jié)構(gòu)對?。瓼 e 的轉(zhuǎn)運彳丁作J } J 。3 ．分泌途徑對于M x l R T l 蛋白的正確定位十分必要為證實M x I R

2、 T l 在質(zhì)膜上發(fā)揮離子轉(zhuǎn)運功能，利用M x l R T l ：：G F P 融合蛋白在酵母細胞中研究發(fā)現(xiàn)其定位于質(zhì)膜和胞內(nèi)的膜( 囊) 泡內(nèi)。缺鐵條件下( 加入鐵螯合劑) 培養(yǎng)的酵母細胞內(nèi)，點狀綠色熒光增多，暗示膜泡包裹的M x l R T l 通過分泌途徑完成質(zhì)膜的定位過程。同時發(fā)現(xiàn)刪切信號肽的M x l R T l 不能發(fā)揮F e 、C d 的轉(zhuǎn)運功能證實了信號肽在分泌過程中的作用，也說明分泌途徑在蛋白定位中的重要性。4 ．不同

3、鐵離子濃度影響M x l R T l ：：G F P 蛋白定位及蛋白豐度通過對不同鐵濃度下M x l R T l ：：G F P 的定何觀察，發(fā)現(xiàn)缺鐵條件。卜．融合蛋白分布在酵母細胞內(nèi)的點狀結(jié)構(gòu)，而正常鐵條件‘卜．綠色熒光可集中在質(zhì)膜的部分區(qū)域。隨著培養(yǎng)基中鐵濃度的增高和培養(yǎng)時間的延長，細胞內(nèi)的熒光強度減弱，暗示了M x l R T l 蛋白的降解過程。為進一步探究這一過程，應(yīng)用帶有誘導(dǎo)型啟動予的表達載體對鐵影響M x l R T l

4、細胞定位及蛋白豐度開展了實驗。結(jié)果表明：過量誘導(dǎo)表達M x I R T I ：：G F P 融合蛋白的酵母細胞中，在液泡中會出現(xiàn)綠色熒光，熒光強度隨鐵濃度的增加而增強。暗示了M x I R T l 的降解是依賴丁液泡的降解途徑，外源鐵濃度的增加會加速這一過程。通過蛋白印跡的實驗表明，過鼙鐵條件下( > 1m M F e 2 + ) 培養(yǎng)的酵母細胞中，M x l R T I ：：G F P 的蛋白豐皮下降，而缺鐵條件下的蛋白車度和朱

5、處理細胞之間無明顯差異。通過M x l R T l ：：G F P 在內(nèi)吞突變體( e n d 4 ) 酵母細胞中的定位研究發(fā)現(xiàn)，綠色熒光仍然可以定位在液泡內(nèi)，表明降解途徑不依賴或不完全依賴E N D 4 基岡介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑，發(fā)生降解的蛋白可能米源于新合成的蛋白。而在蛋白酶A 突變體( p e p 4 ) 細胞中，綠色熒光入量在液泡中積累，暗示了降解過程對P E P 4 基因的依賴。5 ．M x l R T l 蛋白在植物細胞定位丁質(zhì)膜

6、和胞內(nèi)的膜結(jié)構(gòu)為了解M x l R T l 在植物細胞中的定位，分別川瞬時表達載體和穩(wěn)定表達載體對B Y - 2 原生質(zhì)體和懸浮細胞進行了轉(zhuǎn)化。發(fā)現(xiàn)瞬時表達和穩(wěn)定表達的M x l R T ：：G F P 融合蛋白定位于質(zhì)膜和胞內(nèi)的膜結(jié)構(gòu)上。加鐵和缺鐵處理其細胞定位和熒光強度未發(fā)生變化，暗示植物細胞與酵母細胞的調(diào)控機制存在不同，可能需要整個植株或某些器官對鐵濃度的反應(yīng)。6 ．轉(zhuǎn)基岡水稻植株中正、反義表達載體轉(zhuǎn)化的株系T 1 代種子朱表現(xiàn)金