嚴(yán)重燙傷后大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞刷狀緣二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體（PepT1）的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)功能的變化.pdf

1、本文研究目的：為明確機(jī)體在嚴(yán)重創(chuàng)傷情況下小腸粘膜上皮細(xì)胞刷狀緣二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體的功能變化規(guī)律，制作大鼠嚴(yán)重燙傷的在體模型，并利用此模型研究創(chuàng)傷后大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞刷狀緣二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體的轉(zhuǎn)運(yùn)和攝取功能的變化，進(jìn)一步明確嚴(yán)重燙傷大鼠小腸上皮細(xì)胞損傷后二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體功能。 研究方法：SD大鼠正常飼養(yǎng)1W后，背部剃毛。鹽酸氯氨酮腹腔麻醉后制成30％TBSAⅢ度燙傷模型，經(jīng)病理檢測(cè)和大鼠小腸粘膜厚度、絨毛高度、隱窩深度及絨毛表面積等指標(biāo)確定模型

2、的標(biāo)準(zhǔn)化。制作大鼠小腸的外翻小腸囊，將取下的腸段在Krebs液中輕輕清洗，擠出內(nèi)容物，向下翻轉(zhuǎn)小腸段。腸段外翻后，先結(jié)扎腸囊的一端，然后用取樣器取0.2ml的Krebs液，沿漿膜壁慢慢注入到漿膜腔中，結(jié)扎另一端，外翻腸囊即制作完成。新制備的外翻腸囊用Krebs液清洗后放進(jìn)盛有Krebs液的培養(yǎng)皿中。將制作完成的外翻腸囊浸入含二肽溶液(3H-Gly-Sar，10μCi)的三角燒瓶中，注入含95％O2、5％CO2的混合氣體后，蓋緊瓶蓋，置于

3、37℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中孵育15min，振蕩速率為100r/min。孵育完成后取出腸囊，迅速用冰鹽水沖洗4遍，置冰板上剪開腸囊一端，倒出0.2ml的漿膜液。漿膜腔內(nèi)用0.4ml的Krebs液輕輕沖洗2遍，得轉(zhuǎn)運(yùn)液，共1.0ml；取腸囊中段腸片約0.5×0.5cm，稱重，經(jīng)裂解液處理后即得攝取液。用此外翻小腸囊研究燙傷大鼠小腸上皮細(xì)胞刷狀緣二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體對(duì)二肽的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)功能。RT-PCR檢測(cè)不同情況下二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體的表達(dá)水平。 研究結(jié)

4、果：燙傷后大鼠光鏡下小腸腸壁較對(duì)照組明顯變薄，絨毛變短，細(xì)胞腫脹脫落，粘膜腺體稀疏排列。圖像分析見創(chuàng)傷組大鼠小腸粘膜厚度、絨毛高度、隱窩深度及絨毛表面積均顯著低于對(duì)照組(P≤0.01)。燙傷后大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞刷狀緣二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體的攝取功能和轉(zhuǎn)運(yùn)功能均明顯下降(P≤0.05)；燙傷后大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞刷狀緣二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體轉(zhuǎn)(PepT1)mRNA明顯下降。 研究結(jié)論：機(jī)體在嚴(yán)重創(chuàng)傷(大面積燙傷)時(shí)腸上皮細(xì)胞二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體(PepT1

5、)的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)功能有明顯的變化。研究顯示，燙傷大鼠腸系膜血管搏動(dòng)明顯減弱，血管變細(xì)，血液流速減慢，腸管色澤明顯變淡，提示燙傷后胃腸道等內(nèi)臟器官的血液供應(yīng)減少；由于腸道粘膜上皮細(xì)胞絨毛的高度、隱窩深度及粘膜的厚度均較正常明顯下降，這從解剖結(jié)構(gòu)上提示胃腸道的生物學(xué)功能將受到嚴(yán)重的影響。對(duì)腸上皮細(xì)胞二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體(PepT1)的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)功能的研究證實(shí)，嚴(yán)重創(chuàng)傷時(shí)二肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體的轉(zhuǎn)運(yùn)和攝取功能均較正常時(shí)明顯下降，其功能下降的本質(zhì)變化是PepT1m