油酸通過未折疊蛋白反應(yīng)調(diào)節(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白的表達(dá).pdf

1、油酸是食用油的主要成分。已有研究表明，在腸粘膜上皮細(xì)胞中，與其它脂肪酸相比，油酸是一種公認(rèn)的具有強(qiáng)的誘導(dǎo)富含甘油三酯脂蛋白合成與分泌的脂肪酸，它通過促進(jìn)胞膜膽固醇向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)運(yùn)輸，增加膽固醇及其酯的分泌，此外，在無外源膽固醇的條件下，油酸可促進(jìn)膽固醇的合成。動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在高膽固醇的條件下，高濃度的油酸可降低膽固醇的吸收率，流行病學(xué)調(diào)查的結(jié)果表明，油酸具有降低血漿LDL膽固醇濃度的作用，與多不飽和脂酸一道被稱為“健康脂酸”。然而，在腸粘

2、膜上皮細(xì)胞中，油酸影響膽固醇的吸收與運(yùn)輸機(jī)制，目前還不清楚。
　　 高膽固醇血癥是導(dǎo)致動脈粥樣硬化的重要危險(xiǎn)因子。除機(jī)體自身合成的膽固醇外，食物膽固醇是導(dǎo)致高膽固醇血癥的重要因素，減少小腸對食物與膽汁膽固醇的吸收有利于降低血液膽固醇的水平；因此小腸在保持機(jī)體膽固醇穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用。NPC1L1 (Niemann-Pick C1-Like 1)，分布在腸粘膜上皮細(xì)胞刷狀緣側(cè)，是負(fù)責(zé)膽固醇吸收的重要轉(zhuǎn)運(yùn)體，NPC1L1敲除的小鼠

3、完全抵抗食物誘導(dǎo)的高膽固醇血癥，即使用高膽固醇的食物飼養(yǎng)，也不會患高膽固醇血癥。ABCG5/8異二聚體也分布在腸粘膜上皮細(xì)胞刷狀緣側(cè)，通過促進(jìn)固醇的外排調(diào)節(jié)膽固醇的吸收。HMGCR是膽固醇合成的限速酶。部分合成與吸收的膽固醇在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上經(jīng)?；o酶A∶膽固醇?；D(zhuǎn)移酶2（Acyl-Coenzyme A CholesterolAcyltransferase,ACAT2）催化形成膽固醇酯。在腸與肝中，富含甘油三酯的酯蛋白的裝配與分泌，MTP（M

4、icrosomal triglyceride transfer protein）是必不可少的重要轉(zhuǎn)運(yùn)體。固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-2(sterol regulatoryelement-binding protein-2，SREBP-2)是結(jié)合在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的轉(zhuǎn)錄因子，經(jīng)蛋白裂解活化，促進(jìn)膽固醇合成與吸收基因的表達(dá)。已有文獻(xiàn)報(bào)道，它正向調(diào)節(jié)NPC1L1、HMGCR(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase)

5、的表達(dá)，負(fù)向調(diào)節(jié)MTP的表達(dá)。
　　內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是蛋白質(zhì)合成、折疊，合成膽固醇及脂酸，維持鈣離子穩(wěn)態(tài)的重要場所。當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能受到干擾，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生，通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激活化一系列基因的表達(dá)，增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)處理未折疊蛋白的能力，減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激造成的壓力。已有文獻(xiàn)報(bào)道，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response，UPR)信號通路促進(jìn)或抑制SREBP-2的成熟，進(jìn)而調(diào)節(jié)其調(diào)控的基因的表達(dá)。近年來的研究表明，內(nèi)

6、質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過未折疊蛋白反應(yīng)（UPR）的不同信號通路正向或負(fù)向調(diào)節(jié)SREBP-2調(diào)控的基因表達(dá)。已有文獻(xiàn)報(bào)道，油酸可引起肝細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，從而影響apoB100的分泌。但是，在腸粘膜上皮細(xì)胞膽固醇吸收過程中，油酸是否可引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，進(jìn)而影響膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白的表達(dá)，目前還不是很清楚.
　　 本文用腸粘膜上皮細(xì)胞CaCo-2作模型，用各種脂質(zhì)微團(tuán)溫育細(xì)胞，探討油酸對腸粘膜上皮細(xì)胞膽固醇吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，以及油酸誘導(dǎo)

7、的UPR對膽固醇關(guān)鍵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的調(diào)節(jié)作用.用牛磺膽酸鈉（TC 5mM），TC與膽固醇(CHOL 0.2mM)、TC與油酸(0.25mM,0.5mM,1.0 mM)及膽固醇(CHOL 0.2mM)、以及TC與油酸(0.25mM,0.5mM,1.0 mM)制備的脂質(zhì)微團(tuán)孵育CaCo-2細(xì)胞，24 小時(shí)后，用RT-PCR檢測NPC1L1、ABCG8、HMGCR、ACAT-2、MTP、剪切型XBP1、CHOP mRNA 水平的變化,用Wester

8、n Blotting檢測BIP、ATF6(Activating transcription factor-6)、SREBP2、NPC1L1、ABCG8 蛋白水平的變化。并利用UPR的抑制劑4-苯基丁酸（4-phenyl-butyric acid，PBA）抑制UPR，闡明UPR 在調(diào)節(jié)膽固醇相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)中的作用。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：用不同的脂質(zhì)微團(tuán)孵育CaCo-2細(xì)胞，在mRNA與蛋白水平ACAT-2的表達(dá)無變化；蛋白水平S

9、REBP-2的表達(dá)無變化；在有或無微團(tuán)膽固醇的條件下，高濃度的油酸（0.5mM、1mM）增加了剪切型XBP1(X-box bindingprotein 1)mRNA的數(shù)量，增加了BIP（immunoglobulin heavy chain-bindingprotein）蛋白及CHOP（DNA-damage-inducible transcript 3）的表達(dá)，促進(jìn)了ATF-6的成熟，誘發(fā)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；在有微團(tuán)膽固醇的條件下，油酸以濃度依

10、賴的方式增加了ABCG8的表達(dá)；降低了NPC1L1、HMGCR的表達(dá)，MTP的表達(dá)顯著增加；相反，在無微團(tuán)膽固醇存在的條件下，油酸，增加了NPC1L1、HMGCR的表達(dá)。
　　 用UPR的抑制劑PBA 處理細(xì)胞，PBA 抑制了XBP1的選擇性剪接與ATF-6的成熟，消除了油酸引起的CHOP和BIP表達(dá)上調(diào)，抑制了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生。
　　 用PBA 處理細(xì)胞，抑制了高濃度的油酸通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起的NPC1L1、HMGCR、