氧化應(yīng)激對仔豬腸細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)能力及轉(zhuǎn)運(yùn)載體表達(dá)量的影響.pdf

1、本文以敵草快(diquat)為氧化應(yīng)激源，研究氧化應(yīng)激對仔豬腸黏膜刷狀緣囊泡(BBMV)和基底膜囊泡(BLMV)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的影響及可能的分子機(jī)制以及硒的抗氧化效果。 所用仔豬腸黏膜來自12頭仔豬(4周齡)，按體重相近的原則分為3個組，每個組4個重復(fù)，每個重復(fù)1頭豬，進(jìn)行為期49d的飼養(yǎng)試驗。1組為對照組，腹腔注射適量生理鹽水(正式試驗開始第一天)，硒的水平0.2mg/kg；2組為低硒應(yīng)激組，硒的水平0.2mg/kg，腹腔注射敵草

2、快(diquat)lO mg/kg體重(于正式實驗開始第一天注射一次)；3組為高硒應(yīng)激組，腹腔注射diquat 10mg/kg體重(于正式實驗開始第一天注射一次)，硒的水平0.4mg/kg。試驗結(jié)束后，屠宰所有試驗豬只，分離空腸中段，刮取腸黏膜。通過檢測腸黏膜中的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、黃嘌呤氧化酶(XOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性等氧化應(yīng)激指標(biāo)，評價腸黏膜的氧化應(yīng)激狀態(tài)。采用氯化鎂沉淀法分別提取

3、BBMV和BLMV，檢測BBMV和BLMV標(biāo)志酶活性和富集率來反應(yīng)氧化應(yīng)激對腸黏膜的損傷和BBMV、BLMV的提取效果；在37℃水浴中，利用同位素標(biāo)記技術(shù)和快速過濾技術(shù)研究BBMV和BLMV葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)。利用RT-PCR技術(shù)研究腸黏膜鈉依賴性葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體1(SGLT<,1>)mRNA和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體2(GLUT<,2>)mRNA表達(dá)情況。 結(jié)果表明： ①與正常組相比，低硒應(yīng)激組和高硒應(yīng)激組SOD、GSH-PX活性極顯著

4、降低(P<0.01)，MDA濃度、XOD活性極顯著升高(P<0.01)。與低硒應(yīng)激相比，高硒應(yīng)激組XOD活性顯著降低(P<0.05)，MDA、SOD、GSH-PX差異不顯著； ②隨著鈉離子濃度的增加，BBMV葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)增加；與正常組相比，低硒應(yīng)激組和高硒應(yīng)激組在不同鈉離子水平下，BBMV葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量均極顯著降低(P<0.01)：低硒應(yīng)激組與高硒應(yīng)激組之間差異不顯著。根據(jù)回歸分析可知，對照組在鈉離子濃度達(dá)到138.3 mM時，BB

5、MV葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量達(dá)到最大值147.70；低硒應(yīng)激組在鈉離子濃度達(dá)到259.83mM時，BBMV葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量達(dá)到最大值109.40；高硒應(yīng)激組在鈉離子濃度達(dá)到181.70mM時，葡萄糖濃度轉(zhuǎn)運(yùn)達(dá)到最大值104.09。 ③不同濃度葡萄糖對BBMV葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量影響：在葡萄糖濃度為0.1 mM，與正常組相比，低硒應(yīng)激組和高硒應(yīng)激組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)均極顯著下降(P<0.01)，低硒應(yīng)激組和高硒應(yīng)激組之間無顯著差異；當(dāng)葡萄糖濃度為1mM，與正常組

6、相比，低硒應(yīng)激組和高硒應(yīng)激組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)均極顯著下降(P<0.01)，與低硒應(yīng)激組相比，高硒應(yīng)激組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)顯著升高(P<0.05)； ④不同濃度葡萄糖對BLMV葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量的影響：在葡萄糖濃度為0.1 mM，與正常組相比，低硒應(yīng)激組和高硒高硒組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)均極顯著下降(P<0.01)，與低硒應(yīng)激組相比，高硒應(yīng)激組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)顯著上升(P<0.05)；在葡萄糖濃度為1mM，與正常組相比，低硒應(yīng)激組和高硒應(yīng)激組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)極顯著下降(P<

7、0.01)，與低硒應(yīng)激組相比，高硒應(yīng)激組葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)顯著上升(P<0.05)； ⑤與正常組相比，低硒應(yīng)激組和高硒應(yīng)激組SGLT<,1>mRNA、GLUT<,2>mRNA表達(dá)量極顯著下降(P<0.01)；低硒應(yīng)激組與高硒應(yīng)激組之間的差異不顯著。 結(jié)論： ①氧化應(yīng)激引起腸黏膜損傷，使腸黏膜標(biāo)志酶堿性磷酸酶、鈉鉀ATP酶、蔗糖酶活性極顯著下降。 ②氧化應(yīng)激引起腸黏膜BBIVIV和BLMV葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)能力極顯著下降，