化濁解毒固本方聯(lián)合5-氟尿嘧啶對(duì)H22荷瘤小鼠VEGF、MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本研究以癌株傳代的方式建立 H22荷瘤小鼠模型，通過觀察化濁解毒固本方、5-氟尿嘧啶（5Fu）以及化濁解毒固本方聯(lián)合5-氟尿嘧啶等不同治療干預(yù)對(duì)H22荷瘤小鼠生存狀態(tài)、瘤體大小、免疫情況、病理變化以及相關(guān)腫瘤指標(biāo)的影響，評(píng)價(jià)聯(lián)合用藥的抗癌效果，從肝癌的治療機(jī)理入手，探討中醫(yī)藥在肝癌的中西醫(yī)結(jié)合治療中所發(fā)揮的作用，為原發(fā)性肝癌的中西醫(yī)結(jié)合治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：通過癌株傳代法將稀釋后的腫瘤細(xì)胞注射于小鼠右腋皮下，建立H2

2、2肝癌小鼠模型。將已成功生長腫瘤的40只小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，包括模型組（M）、化濁解毒固本方組（Z）、5-氟尿嘧啶組（X）以及化濁解毒固本方聯(lián)合5-氟尿嘧啶組（L）。造模成功后給予相應(yīng)藥物進(jìn)行干預(yù)，其中中藥組以化濁解毒固本方配方?jīng)_劑0.2ml/d劑量灌胃治療；西藥組以5-氟尿嘧啶20mg/kg/d腹腔注射治療；聯(lián)合用藥組上午給予化濁解毒固本方灌胃治療，下午予5-氟尿嘧啶腹腔注射治療；模型組以0.4 ml/d生理鹽水進(jìn)行灌胃維持

3、。連續(xù)給藥12天，定期觀察各組小鼠的毛色光澤、進(jìn)食情況、精神狀態(tài)、體重變化以及死亡情況等，于末次治療后次日，頸椎脫臼法處死小鼠，并鈍性剝離小鼠腫瘤組織、脾臟組織、胸腺組織，分別計(jì)量稱重，計(jì)算各治療組的抑瘤率、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)腫瘤組織進(jìn)行甲醛固定、病理切片，采用免疫組化法（IHC）檢測(cè) VEGF、MMP-9蛋白的表達(dá)，并對(duì)蘇木素-伊紅（HE）染色后的腫瘤組織進(jìn)行病理觀察。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠的一般狀況:

4、各實(shí)驗(yàn)組小鼠治療后生存狀態(tài)都明顯不如治療前，尤其模型組，小鼠精神萎靡，毛色枯糙，食欲不振，體型瘦削，體重?zé)o明顯增長，右腋下腫物明顯腫大可見。與西藥組相比，中藥組和聯(lián)合用藥組在精神狀態(tài)、食欲情況和體重增長等方面都占明顯優(yōu)勢(shì)。
　　2.小鼠的腫瘤生長情況:在抑瘤方面，聯(lián)合用藥組抑瘤率最高，西藥組抑瘤率高于中藥組。平均瘤重方面，聯(lián)合用藥組瘤重最小，其次是西藥組、中藥組、模型組。三個(gè)治療組瘤重均小于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；其中，聯(lián)合用藥

5、組瘤重小于西藥組和中藥組，差異顯著；西藥組瘤重小于中藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.小鼠脾指數(shù)情況:中藥組小鼠脾指數(shù)最高，明顯高于其它各組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；聯(lián)合用藥組次之，明顯高于西藥組和模型組，差異明顯；西藥組小鼠脾指數(shù)較之模型組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.小鼠胸腺指數(shù)情況:與模型組相比，各治療組荷瘤小鼠胸腺指數(shù)均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；肝癌小鼠各治療組間相比，中藥組、聯(lián)合用藥組小鼠胸腺指數(shù)明顯高于西藥組，差異

6、明顯；聯(lián)合用藥組胸腺指數(shù)與中藥組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.小鼠腫瘤組織中VEGF的表達(dá):各治療組肝癌小鼠腫瘤組織中 VEGF含量明顯低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；聯(lián)合用藥組腫瘤組織中VEGF含量顯著低于中藥組和西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；西藥組腫瘤組織中VEGF含量低于中藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6.小鼠腫瘤組織中MMP-9的表達(dá):肝癌小鼠各組間比較，腫瘤組織中MMP-9蛋白表達(dá)量有顯著差異，與模型組相比，各治療組

7、組織MMP-9蛋白表達(dá)量均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；其中聯(lián)合用藥組 MMP-9表達(dá)量最低，明顯低于中藥組和西藥組，差異顯著；西藥組組織MMP-9低于中藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　7.小鼠腫瘤組病理變化情況:模型組腫瘤組織生長旺盛，腫瘤細(xì)胞特異性強(qiáng)，核染顏色很深，嗜堿性很強(qiáng)，鏡下血管豐富；中藥組腫瘤組織生長緩慢，大量腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)變性裂解，組織出現(xiàn)大面積壞死，細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核嗜酸性增強(qiáng)；西藥組腫瘤組織生長不旺盛，明顯出現(xiàn)片狀腫瘤壞死