西門木炔酸的分離純化、代謝與功能研究.pdf

1、西門木炔酸（ximenynic acid或santalbic acid）是一種天然的十八碳共軛烯炔酸，最早在檀香科的植物中發(fā)現(xiàn)，迄今已有七十多年。它主要存在于山柚子科、鐵青樹科和檀香科的種子油中，含量從1～95％不等。其特殊的烯炔共軛結(jié)構(gòu)賦予它許多生物活性，如抗細(xì)菌、抗真菌、殺蚴蟲及抗炎等活性。本論文以澳洲檀木Santalum spicatum的檀香籽油（含西門木炔酸約35％）和檀香籽油提純產(chǎn)物西門木炔酸為研究對(duì)象，研究?jī)?nèi)容包括西門木炔

2、酸的提取純化、體內(nèi)與體外代謝、抗癌活性試驗(yàn)等三個(gè)部分。
　　第一部分 西門木炔酸自由脂肪酸和甘油三酯的分離純化
　　西門木炔酸的分離。以檀香籽油為原料，經(jīng)水解、酸化、結(jié)晶等步驟提取西門木炔酸自由脂肪酸純品，摸索西門木炔酸最佳結(jié)晶條件。
　　檀香籽油甘油三酯的分離。Santalum spicatum檀香籽油主要含有三種甘油三酯，包括含三個(gè)西門木炔酸分子的XXX、含兩個(gè)西門木炔酸分子的XXO/XOX以及含一個(gè)西門木炔酸分子

3、的OOX/OXO。使用C18反相硅膠粉末填充的層析柱，通過(guò)乙腈/異丙醇洗脫液，可以將三種不同的甘油三酯分離。
　　構(gòu)建HPLC快速分離和鑒定檀香籽油不同形式甘油三酯的方法。具體如下:使用反相硅膠HPLC和UV檢測(cè)器鑒定檀香籽油中不同形式的甘油三酯。HPLC洗脫液為乙腈/異丙醇，UV檢測(cè)器設(shè)定236nm的吸收波長(zhǎng)，以2.5mL/min流速進(jìn)行洗脫。
　　第二部分 檀香籽油或西門木炔酸對(duì)脂肪酸代謝的影響
　　體內(nèi)脂肪酸代謝

4、研究。與橄欖油相比，飼喂檀香籽油后小鼠體重?zé)o顯著差異;檀香籽油使血糖顯著上升和并提高低密度脂蛋白水平;顯著降低大腦組織總n-3PUFA含量;顯著降低肝臟n-9單不飽和脂肪酸、顯著提高n-3多不飽和脂肪酸的含量。
　　體外脂肪酸代謝研究。西門木炔酸（從檀香籽油中提取分離獲得）干預(yù)HepG2細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，n-9單不飽和脂肪酸C18:1n-9、C20:1n-9和C24:1n-9與總n-9單不飽和脂肪酸顯著下降，這種作用可能與西門木炔酸能抑

5、制硬脂酰輔酶A去飽和酶[stearoyl-CoA desaturase(SCD)]基因的表達(dá)有關(guān);西門木炔酸顯著降低C22:6n-3(DHA)的含量，并且抑制DHA合成關(guān)鍵酶FADS1（△5去飽和酶）和FADS2（△6去飽和酶）的表達(dá)。
　　第三部分 西門木炔酸的抗癌活性研究
　　基于西門木炔酸的抗炎活性的報(bào)道以及炎癥與癌癥的密切聯(lián)系，本實(shí)驗(yàn)以西門木炔酸純品為研究對(duì)象，研究西門木炔酸對(duì)人癌細(xì)胞的細(xì)胞周期、增殖、凋亡的影響及潛

6、在機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　西門木炔酸顯著阻滯HCT116和HepG2細(xì)胞周期G1-S的轉(zhuǎn)換。具體表現(xiàn)為:G0/G1期細(xì)胞數(shù)量增多，S期和G2/M期細(xì)胞數(shù)量顯著下降。同時(shí)西門木炔酸抑制HepG2細(xì)胞的細(xì)胞周期蛋白CCND3和CCNE1的基因表達(dá)，抑制GCN5L2的蛋白表達(dá);還抑制CCND3和CCNE1和CDK6基因在HCT116中的表達(dá)。
　　通過(guò)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)西門木炔酸能顯著抑制HepG2細(xì)胞的增殖，并顯著