胰島分離純化以及活性和功能保持的研究.pdf

1、目前全球約有3.5億人患有糖尿病，世界衛(wèi)生組織(WHO)預(yù)測，在接下來的10年里，由糖尿病并發(fā)癥引發(fā)的死亡將會超過50％。糖尿病患者中Ⅰ型糖尿病約占10％，目前主要采用外源性胰島素替代治療的方法，然而相對于傳統(tǒng)的胰島素注射治療，移植治療是控制并發(fā)癥的產(chǎn)生、提高患者生存質(zhì)量的糖尿病最佳治療手段。胰島是生物活性物質(zhì)，因此胰島移植的成功取決于胰島分離提取后的活性、運輸中活性的保持等。因此，本文以胰島為研究對象，并結(jié)合本實驗室多年從事海藻酸鈣凝

2、膠支架研究所積累的成功經(jīng)驗，對胰島的獲得、純化以及包埋胰島進(jìn)行研究。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)建立了高滲-低滲法優(yōu)化胰島純化的方法。胰島細(xì)胞表面存在葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白-2(Glut-2)，而外分泌細(xì)胞表面不表達(dá)該種蛋白，根據(jù)葡萄糖可以自由進(jìn)出胰島細(xì)胞這一特點，采用高滲-低滲處理可以有效裂解外分泌細(xì)胞，從而將其從胰島中去除，獲得純度較高的胰島。采用Plackett-Burman實驗設(shè)計法對高滲-低滲處理過程中的關(guān)鍵因素進(jìn)行了篩選。確

3、定高滲液濃度及高滲處理時間為影響胰島純度的顯著性因素。并且，在保持了胰島功能和活性基礎(chǔ)上，優(yōu)化條件下獲得的胰島純度顯著性高于空白組(P＜0.05)，其純度從87％提高到98％。
　　(2)將海藻酸鈉包埋技術(shù)應(yīng)用于胰島運輸過程中的短期保存，發(fā)現(xiàn)海藻酸鈉包埋胰島的活性(97.8％)顯著高于裸胰島對照組(90.2％)。其次采用單因素實驗確定了影響海藻酸鈉包埋胰島運輸過程中的關(guān)鍵因素為預(yù)培養(yǎng)時間(0-24h)、血清濃度(2％-20％)、保

4、存時間(12-24h)，并進(jìn)一步采用響應(yīng)面Box-Behnken法優(yōu)化得到胰島活性隨預(yù)培養(yǎng)時間、血清濃度、保存時間變化的方程，通過實驗驗證發(fā)現(xiàn)，該方程的預(yù)測值與實驗值具有高吻合度(91.7-99.2％)，表明建立的方程具有可信度，能夠用于指導(dǎo)胰島運輸過程中保存工藝的建立。
　　(3)本論文建立了工程化胰島。由于胰島單細(xì)胞可以聚集重組為胰島類似物，因此本文采用海藻酸鹽包封胰島單細(xì)胞的方法制備胰島細(xì)胞團。其形態(tài)與天然胰島相似，直徑在1