小球藻生長(zhǎng)因子(CGF)活性物質(zhì)的初步分離純化以及生物活性的研究.pdf

1、本研究報(bào)告主要包括三個(gè)方面:小球藻生長(zhǎng)因子提取方法的確定、CGF活性的研究及活性物質(zhì)跟蹤手段的確定、CGF中活性物質(zhì)的初步分離純化。
　　首先利用免疫活性、抗氧化活性等指標(biāo)，比較高壓水提法、超聲法、酶解法、韓士群專利法制備的CGF，發(fā)現(xiàn):高壓水提法的產(chǎn)率雖然低于酶解法，但其CGF能夠極顯著地促進(jìn)Ana-1、RAW264.7細(xì)胞的生長(zhǎng)，同時(shí)也能促進(jìn)Ana-1吞噬中性紅，吞噬率達(dá)到210.5％，還能顯著地清除OH-，清除率為80％。最

2、終確定高壓水提法為小球藻生長(zhǎng)因子的最佳提取方法。
　　其次發(fā)現(xiàn)CGF在100μg/mL時(shí)與Ana-1共同培養(yǎng)24h后，可以顯著地促進(jìn)細(xì)胞吞噬中性紅，吞噬率為213.5％，還能夠顯著地抑制LPS誘導(dǎo)細(xì)胞釋放NO的量。CGF的濃度為75μg/mL，24h可以使Ana-1細(xì)胞增殖52.3％;200μg/mL的CGF與HEK-293細(xì)胞共同培養(yǎng)48h，可以使細(xì)胞增殖310％，并呈量效關(guān)系;CGF對(duì)Hela、HepG2細(xì)胞的促增殖活性與時(shí)間

3、呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，400μg/mL的CGF與細(xì)胞培養(yǎng)72h時(shí)的促增殖活性與24h相比下降了50％、66.9％;CGF均能促進(jìn)大腸桿菌、乳酸菌細(xì)胞的增殖，并且促增殖活性呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系。
　　然后將CGF用丙酮、乙醇分別分離，發(fā)現(xiàn)分離得到的沉淀對(duì)Ana-1細(xì)胞的增殖活性高于上清，同時(shí)乙醇沉淀的活性也高于丙酮沉淀的，增殖活性為59.2％;其次用無水乙醇將CGF分離成粗蛋白、粗多糖等組分，發(fā)現(xiàn)粗蛋白對(duì)Ana-1細(xì)胞的增殖活性顯著地高于其他組