小球藻抗氧化多肽的制備及其抗氧化和降糖活性研究.pdf

1、小球藻（Chlorella vulgaris）是一種球形或橢圓形單細(xì)胞淡水藻類，直徑3～8微米，無性生殖，是地球上最早的生命之一，出現(xiàn)在20多億年前，是一種高效的光合植物，以光合自養(yǎng)生長繁殖，分布極廣，極其容易獲得，其作為一種高蛋白的海洋生物資源，高效益的實(shí)用價(jià)值還未被開發(fā)。近年來關(guān)于小球藻多肽防治糖尿病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究較少，其防治糖尿病的作用機(jī)制研究還有待進(jìn)一步深入。小球藻多肽具有抗氧化活性，抗氧化活性對糖尿病的治療和預(yù)防有一

2、定相關(guān)性?；诖?，本文以小球藻為原料，制備其抗氧化活性多肽，并分析其降糖活性，通過秀麗隱桿線蟲體內(nèi)的氧化酶活性、氧化簇水平、高糖環(huán)境下線蟲壽命等方面對小球藻多肽的抗氧化活性和降糖效果進(jìn)行探究，希望通過線蟲實(shí)驗(yàn)建立理論基礎(chǔ)，為后續(xù)的小鼠實(shí)驗(yàn)做鋪墊。
　　為了避免工廠破壁造成的蛋白損失，本論文對小球藻破壁條件進(jìn)行了探索，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得到了的4個(gè)最佳的小球藻破壁條件，氫氧化鈉濃度、提取時(shí)間、提取溫度和料液比，分別為3.

3、9％、26.8 min、47.3℃和1:31，在此條件下，小球藻可溶性蛋白提取率為5.20%。該方法具有簡單易行，不涉及大型儀器操作，提取時(shí)間適中，可溶性蛋白提取率較高的特點(diǎn)。
　　根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，我們選用復(fù)合風(fēng)味蛋白酶作為小球藻活性多肽制備的蛋白酶，于50℃pH=6的環(huán)境中酶解5h，在該條件下獲得的活性多肽DPPH清除率、超氧自由基清除率、羥自由基清除率、還原性、鐵離子螯合率較高，活性多肽對 DPPH、超氧自由基及羥自由基

4、的半抑制濃度 IC50分別為0.325mg/mL、0.325mg/mL和0.139 mg/mL。活性多肽能使線蟲平均壽命延長39.20%，同時(shí)對處于高氧化性溶液中的線蟲壽命有顯著的提升，對氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性分別提升77.87%和1575.21%，降低活性氧簇13.66%。對α-葡萄糖苷酶活性、α-淀粉酶活性、蔗糖酶活性的半抑制濃度IC50分別為1157.81 mg/mL、1.70 mg/mL和3.38 mg/mL，延長處于高糖

5、環(huán)境中的線蟲平均壽命43.83%。多肽溶液經(jīng)2種不同分子量的葡聚糖凝膠純化，獲得2種分子量相近的多肽，大小約為11.2 kDa。
　　實(shí)驗(yàn)證明，小球藻活性多肽具有較為理想的體外抗氧化能力，具有激發(fā)細(xì)胞內(nèi)氧化物水解酶活性的效果，對過氧化氫酶活性提升尤為明顯，其作用機(jī)理有待進(jìn)一步的研究，活性多肽在協(xié)助細(xì)胞消除過剩自由基的基礎(chǔ)上延長細(xì)胞壽命，保護(hù)細(xì)胞免受過氧化而凋亡?；钚远嚯谋憩F(xiàn)出較高的多糖（雙糖）水解酶抑制活性，可以減少生物體內(nèi)的多糖