地鱉蟲多肽的分離及抗氧化活性研究.pdf

1、地鱉蟲（Eupoliphaga Sinensis Walker）是一種傳統(tǒng)的中藥材，具有散血淤、解凝活血、接骨續(xù)筋等功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究及臨床試驗(yàn)證明地鱉蟲具有抑制腫瘤、調(diào)節(jié)血脂、抗衰老等功效，其藥食兩用的特性使得地鱉蟲的研究越來越受到人們的關(guān)注。地鱉蟲蛋白質(zhì)含量很高，以干重計(jì)，地鱉蟲蛋白質(zhì)含量高達(dá)60％以上，是典型的高蛋白食品。目前對(duì)地鱉蟲的研究主要集中在其初級(jí)加工工藝及藥理作用方面，對(duì)其蛋白質(zhì)以及抗氧化活性方面的研究卻鮮有報(bào)道。本文以

2、地鱉蟲為原料，利用從韓國引進(jìn)的Arazyme高效蛋白酶對(duì)地鱉蟲酶解工藝進(jìn)行優(yōu)化，通過體外實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)酶解液對(duì)羥自由基、超氧陰離子自由基、DPPH自由基及亞油酸自氧化反應(yīng)的抑制效果;利用陽離子交換層析技術(shù)、陰離子交換層析技術(shù)、制備型高效液相色譜技術(shù)分離酶解液中的抗氧化肽，并測(cè)定各組分的抗氧化活性。主要研究?jī)?nèi)容及成果如下:
　　 1.本研究利用從韓國引進(jìn)的高效Arazyme蛋白酶酶解地鱉蟲，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面分析法對(duì)酶解工

3、藝進(jìn)行優(yōu)化，得到的最佳工藝參數(shù)為:每克地鱉蟲的加酶量為308.6U;酶解時(shí)間5.3h;水料比21.6∶1，在此條件下得到地鱉蟲酶解液中肽鍵含量為10.423mmol/g·pro，與理論值10.462mmol/g·pro較為接近。這說明響應(yīng)面法對(duì)地鱉蟲酶解條件的優(yōu)化具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
　　 2.將地鱉蟲酶解液進(jìn)行冷凍干燥后，配成不同濃度的樣品液，使得其在·OH、O2-·、DPPH反應(yīng)體系中的終濃度分別為10～50mg/mL、0.5

4、～2.5mg/mL、16～80μg/mL;另取地鱉蟲酶解液凍干粉用50mmol/L的PBS(pH=7.0)配成肽含量分別為1.1mg、1.3mg、2.0mg的樣品液。結(jié)果表明:地鱉蟲酶解物對(duì)·OH、02-·、DPPH三種自由基的最高清除率分別為75.15％、31.72％、74.88％，對(duì)亞油酸自氧化反應(yīng)的抑制率最高為95％。由于亞油酸體系是目前國內(nèi)外分離抗氧化肽時(shí)普遍采用的指標(biāo)，因此在后續(xù)分離過程中采用樣品對(duì)亞油酸自氧化反應(yīng)的抑制作用作

5、為分離依據(jù)。
　　 3.采用陽離子交換層析技術(shù)、陰離子交換層析技術(shù)以及高效液相色譜對(duì)地鱉蟲酶解液中的抗氧化肽進(jìn)行分離純化，同時(shí)測(cè)定各個(gè)組分對(duì)亞油酸自氧化反應(yīng)的抑制作用。在起始緩沖液為0.02mol/L pH=4.0的醋酸緩沖液，上樣量為50mg，NaCl洗脫濃度為0.25mol/L的條件下，得到陽離子交換層析的四個(gè)組分FⅠ，F(xiàn)Ⅱ，F(xiàn)Ⅲ，F(xiàn)Ⅳ，其對(duì)亞油酸自氧化反應(yīng)的抑制率分別為73.69％，79.25％，43.65％，0％。在起始