13147.地鱉蟲和黃粉蟲纖溶活性蛋白的分離純化、性質研究及其基因克隆_第1頁
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1、分類號:UDC:密級:學校代號:11845學號:1120806002廣東工業(yè)大學博士學位論文(工學博士)地鱉蟲和黃粉蟲纖溶活性蛋白的分離純化、性質研究及其基因克隆黃明星指導教師姓名、職稱:瑩雅菹教授企業(yè)導師姓名、職稱:無專業(yè)或領域名稱:廑且化堂學生所屬學院:輕工化工堂院論文答辯日期:2Q12生12且2Q目摘要地鱉蟲(Eupolyphagesinensis),又名土鱉蟲、土元等,昆蟲綱(Hexapeda)蜚蠊目(Blattada)鱉蠊科(

2、Corydiidae)蟲,為《中華人民共和國藥典》記載的正品藥材。地鱉蟲在中藥中被使用具有悠久歷史,中國明代李時珍的《本草綱目》,東漢著名醫(yī)學家張仲景的《金匱要略》和漢代的藥物著作《神農本草經》等均有記載。地鱉蟲歷來都做為傳統(tǒng)的活血化瘀類動物藥,現代生化分子及藥理試驗也證明了地鱉蟲具有抗凝血、抗腫瘤、抑制血小板聚集、溶解靜脈血栓等藥效。黃粉蟲(Tenebriomolitor)俗稱黃粉甲、面包蟲,屬于昆蟲綱(Insect),鞘翅目(Col

3、eopter),擬步甲科(Tenebrionide)粉甲屬(Tenebrionini),原產于南美洲,屬于倉庫和貯藏害蟲。因其營養(yǎng)成分高,營養(yǎng)含量居各類活體動物蛋白飼料之首,被譽為“蛋白質飼料寶庫“。近年來,黃粉蟲被逐步開發(fā)為寵物飼料,以及應用于人類的高級營養(yǎng)食品。地鱉蟲和黃粉蟲體內不僅含有豐富的蛋白質、脂肪、氨基酸和其它小分子次生代謝物,同時還含有豐富的纖維蛋白溶解酶類,分離純化這些纖溶活性蛋白并研究它們的性質對開發(fā)新型溶栓藥物具有重

4、要的意義。本文首先研究了纖溶活性蛋白的檢測方法:纖維平板法(fibrinplatemethod)和纖維蛋白酶譜法(fibrinzymography)。其中,纖維平板法可以用來快速地定性和半定量檢測纖溶活性蛋白。本文對該方法中的幾個關鍵因素做了詳細的研究和探討。纖維蛋白酶譜法是一種基于SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳技術的方法,我們通過對該方法中幾個關鍵因素的研究和討論,得到了一種有效而簡便的方法,可以讓蛋白分子量標準的深藍色條帶和纖溶蛋白激活物

5、的透明裂解帶同時在淡藍色的背景下顯示出來。此方法能快速的檢測出未知樣品中纖溶活性蛋白的種類、數量和分子量,從而為后期的純化提供更有價值的信息。其次,我們從地鱉蟲體內分離純化出了一種纖溶活性蛋白。通過30%70%的硫酸銨梯度沉淀、Sephacryl$200HR分子篩、DEAESepharoseFF離子柱和BenzamidineSepharose6B親和純化,最后分離出了地鱉蟲體內含量最大的一種纖溶活性蛋白,該蛋白被命名為ESTL。最終的純

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