中草藥蒲黃和桃仁的纖溶酶分離與純化.pdf

1、心腦血管疾病是危害人類生命和健康的主要疾病之一。因此研制、發(fā)展高效、特異、安全、副作用小的溶血栓藥物，一直是近年來全世界范圍的熱門課題。我國中醫(yī)藥已有悠久的歷史，其中有多種藥物用于治療血栓性疾病。從對活血化瘀藥物的研究看來，中藥的開發(fā)與新藥的發(fā)現(xiàn)己進入一個相互滲透的新階段。 本文的研究目的是篩選出具有纖溶酶活性的中草藥，并對其進行分離和性質(zhì)鑒定。首先選用了臨床常用的、具有活血化瘀作用的中草藥蒲黃和桃仁，提取它們的蛋白質(zhì)，利用纖維

2、蛋白平板法測定纖溶酶活性。用DEAE Sepharose Fast Flow離子交換層析從中草藥蒲黃提取物中分離純化一種具有體外纖溶活性的單一組分，用纖維蛋白板檢測分離后組分的纖溶蛋白活性，天然電泳檢測分離效果，分離后得到了比活力為25.29 U/mg的單一組分，SDS電泳確定該組分的表觀分子量為31，000 D。 用不同的蛋白酶抑制劑作用該分離組分觀察抑制作用，結(jié)果表明該組分的纖維蛋白水解酶活性被PMSF、亮抑肽素、抑肽酶、大

3、豆胰蛋白酶抑制劑以及苯甲脒強烈抑制，表明該分離組分屬于絲氨酸蛋白酶家族。該組分活性較強而且含量較高，其分子大小較適合分子操作。 以纖維蛋白平板為評價方法，采用80％硫銨沉淀、親和層析法對桃仁纖維蛋白水解酶進行純化，利用大豆胰蛋白抑制劑作為配基，以環(huán)氧氯丙烷活化的Sepharose 4B為載體制備親和層析介質(zhì)，利用親和層析對桃仁蛋白提取物進行了分離，得到了一個單一的活性組分，分別采用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)、纖維蛋白-PAG