黑螞蟻纖溶活性蛋白的分離純化及其性質(zhì)研究.pdf

1、螞蟻種類繁多，數(shù)量龐大，分布廣泛，資源豐富，是世界最龐大和最興旺的昆蟲之一，而且歷史悠久，據(jù)統(tǒng)計已存在地球長達(dá)1億年。其具有生命力強，壽命長、營養(yǎng)豐富等特點。其中蛋白質(zhì)含量極高，且含有多種人體所必需的氨基酸、微量元素和礦物質(zhì)。因此，螞蟻不僅具有較高的食用和營養(yǎng)價值，而且具有極為獨特的保健和藥用價值，越來越受到人們的青睞。隨著社會和經(jīng)濟的不斷發(fā)展，螞蟻的食用價值和藥用價值也不斷的被開發(fā)，應(yīng)用前景十分廣闊。
　　本文首次從干黑螞蟻體內(nèi)

2、分離純化得到1種纖溶活性蛋白，并對此蛋白的一些性質(zhì)進行了初步的研究。采用硫酸銨逐級鹽析法對其蛋白質(zhì)進行提取分離，并利用DEAE-52纖維素離子交換層析和Sephacryl S-100葡聚糖凝膠過濾層析柱對分離所得的黑螞蟻的蛋白粗提液進行純化，經(jīng)SDS凝膠電泳檢測，得到相對分子質(zhì)量約為25kD的多肽單鏈。經(jīng)纖溶活性平板法檢測，該蛋白硫酸銨鹽析最佳飽和度濃度為30％～90％，具有較強纖溶活性，其酶活力為101.1735U/ml，經(jīng)檢測，每克

3、黑螞蟻纖溶活性相當(dāng)于67.4552尿激酶國際標(biāo)準(zhǔn)活力單位，Braford法測定蛋白濃度，經(jīng)計算可知其蛋白濃度為2.8041mg/ml，蒽酮硫酸法測定其含糖量，可測得糖含量為8.1714％，表明了該蛋白可能是一種糖蛋白。
　　本實驗研究了不同溫度、pH值對黑螞蟻纖溶活性蛋白酶活性的影響。結(jié)果表明，該酶最適反應(yīng)溫度為45℃，說明該蛋白耐熱性較差，pH在3.0該蛋白酶活力最高，而pH在4.0～8.0范圍內(nèi)，該酶活力基本保持穩(wěn)定;

4、　　此外，本實驗還研究了一系列的物化因子對目的蛋白酶活性的影響。實驗證明:(1)Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Ba2+、Mn2+、Ca2+對該酶均有不同程度的影響，其中，Na+、K+對其酶活性影響較小，Mg2+對該酶纖溶活性有強烈的激活作用，而Zn2+、Ba2+、Mn2+、Ca2+等對此酶活力有明顯的抑制作用;(2)不同抑制劑、表面活性劑與變性劑對黑螞蟻纖溶活性蛋白活性的影響不同，其中紅霉素幾乎對其纖溶活性沒影響;肝素鈉對其活力的影

5、響較小;青霉素對其酶活性有較弱的促進作用;而PMSF對其酶活性具有較強的抑制作用;而用β-巰基乙醇、吐溫-20、DFP、SDS則對該此酶活力有強抑制作用;(3)超聲破、紫外線對黑螞蟻纖溶活性蛋白活性的影響不同，其中，在超聲波作用下，隨著超聲波的頻率的增大和處理時間的延長，黑螞蟻纖溶活性蛋白的酶活力明顯的下降。功率相同時，時間越長，酶活性受到抑制越大，活性下降越明顯;時間相同時，功率越大，超聲波對目的蛋白的作用越強，酶活性抑制效果越明顯，