豆豉纖溶酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)的研究及微膠囊的制備.pdf

1、豆豉纖溶酶(E.C.3.4.21.7)是一種從中國傳統(tǒng)食品豆豉中分離出來的具體較高纖溶活性的絲氨酸蛋白酶。它不僅能直接溶解纖維蛋白,抑制血栓形成,并且能夠抑制機(jī)體凝血,抗血小板聚集等功能。
　　 本論文對DC-10產(chǎn)纖溶酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)、微膠囊的制備及性質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。
　　 (1)采用TAME法作為豆豉纖溶酶的測定方法,操作簡單、快速;精密度較高,重現(xiàn)性高。
　　 (2)對DC-10菌株產(chǎn)纖溶酶的分離

2、純化進(jìn)行了研究。利用硫酸銨鹽析、DEAE-SepharoseFast Flow陰離子交換層析和Sephadex G-75凝膠過濾層析等方法進(jìn)行純化,獲得了纖溶酶單一組分,表觀分子量為30 kDa,最終純化倍數(shù)達(dá)10.17,回收率為16.69％。
　　 (3)對DC-10產(chǎn)纖溶酶的部分酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究并利用N-末端氨基酸序列測定及基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)對此酶進(jìn)行鑒定。該纖溶酶在50℃以下和p

3、H7.0-9.0之間保持穩(wěn)定,最適溫度為35℃;最適PH為8.6;N-末端氨基酸序列及飛行時(shí)間質(zhì)譜測定結(jié)果都表明該酶與納豆激酶氨基酸序列有著極高的相似性。
　　 (4)通過擠壓法豆豉纖溶酶微膠囊,以海藻酸鈉-氯化鈣-殼聚糖體系制備出微膠囊。檢測結(jié)果表明,微膠囊酶活可達(dá)到162.96 IU/mL,包埋率為90.25％。經(jīng)胃酸、膽汁酸處理后酶活114.07 IU/mL以上,對酸有很高的耐受力;經(jīng)人工腸液處理35 min,微膠囊?guī)缀跞?/p>