多氯聯(lián)苯降解酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、多氯聯(lián)苯(polychlorinated biphenyls，PCBs)作為一種持久性污染物，對(duì)環(huán)境及環(huán)境內(nèi)生物的危害早已不容忽視。環(huán)境中多氯聯(lián)苯污染的微生物修復(fù)，一直是國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。不少研究學(xué)者從受多氯聯(lián)苯污染的環(huán)境篩選出具有降解多氯聯(lián)苯作用的菌株，但在多氯聯(lián)苯降解酶的提取及其性質(zhì)分析上卻少有報(bào)道。本論文旨在從表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)中分離純化出多氯聯(lián)苯降解酶，研究其酶學(xué)性質(zhì)，并探討

2、該菌株對(duì)聯(lián)苯降解的途徑。
　　 將本實(shí)驗(yàn)篩選并保藏的表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)在30℃振蕩培養(yǎng)20h，8000rpm離心收集菌體，緩沖溶液洗滌懸浮，在冰浴中超聲破碎得粗抽提液。粗抽提液經(jīng)硫酸銨分級(jí)鹽析、透析脫鹽、Sephadex G-150分子篩柱層析得到純的多氯聯(lián)苯降解酶。
　　 以聯(lián)苯為底物，分析多氯聯(lián)苯降解酶的酶學(xué)性質(zhì)，其最佳的作用條件為:40℃、pH7.0。在pH值為6.

3、0～9.0，溫度在30～60℃時(shí)，該酶穩(wěn)定性好。多氯聯(lián)苯降解酶的米氏常數(shù)Km值為4.96mmol/L，最大反應(yīng)速度Vm為2.03mmol/(L·min)。同時(shí)測(cè)定了部分金屬離子對(duì)多氯聯(lián)苯降解酶酶活力的影響。銅離子和鐵離子對(duì)酶活力影響最大，起到了一定的抑制作用;鉀離子、鎂離子、鈣離子、鋅離子對(duì)酶活力影響不大;鈉離子和鋁離子對(duì)酶活力可能有一定的激活作用。
　　 采用紫外可見(jiàn)分光光度法與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法相結(jié)合的方式來(lái)分析降解過(guò)程中

4、的幾種酶及降解過(guò)程的中間產(chǎn)物，依此來(lái)探討分析表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)對(duì)聯(lián)苯降解的途徑。依據(jù)紫外可見(jiàn)分光光度法和GC-MS法測(cè)定的結(jié)果，推斷表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)對(duì)聯(lián)苯降解的途徑為典型的好氧PCBs/聯(lián)苯降解途徑:聯(lián)苯經(jīng)過(guò)聯(lián)苯雙加氧酶催化氧化生成2，3-二氫二羥基聯(lián)苯;2，3-二氫二羥基聯(lián)苯在2，3-二氫-2，3-二羥基聯(lián)苯脫氫酶的作用下，脫去兩個(gè)氫