梅林青霉纖維素酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、梅林青霉纖維素酶是一種誘導(dǎo)酶,含結(jié)晶纖維素和麥麩的培養(yǎng)基是該菌株的最佳誘導(dǎo)產(chǎn)酶培養(yǎng)基,用發(fā)酵罐培養(yǎng)得到的粗酶液,再用30﹪和70﹪的硫酸銨進(jìn)行分級(jí)沉淀,經(jīng)透析、濃縮后的蛋白溶液進(jìn)行Sephadex G-100分子篩層析分離,β-葡萄糖苷酶(BG)可被直接分離出來,而另外兩種內(nèi)切葡聚糖酶(CMCaseⅠ和CMCaseⅡ)是經(jīng)Sephadex G-100和DEAE Sephadex A-5 0兩步層析分離得到.Na<'+>和Ca<'2+>使

2、三種酶的酶活力增強(qiáng);Mn<'2+>和Ba<'2+>對(duì)三種酶活力的抑制作用不明顯;Zn<'2+>使β-葡萄糖苷酶活力增強(qiáng),使另外的兩種內(nèi)切酶活力下降;Cu<'2+>對(duì)三種酶有顯著的抑制作用;SDS對(duì)β-葡萄糖苷酶有明顯的抑制作用,對(duì)另外的兩種酶活力的影響不大.β-葡萄糖苷酶(BG)既有很高的β-葡萄糖苷酶活性,也有一定的外切葡聚糖酶活性;內(nèi)切葡聚糖酶CMCaseⅠ不僅能夠較強(qiáng)的作用于CMC,而且還可以作用于Whatman濾紙,對(duì)微晶纖維素

3、也有一定的降解作用,該酶對(duì)底物專一性不是很強(qiáng);內(nèi)切葡聚糖酶CMCaseⅡ既有一定的內(nèi)切葡萄糖酶活性,也有很高的木聚糖酶活性.三種純酶的活力依次為1.014U/ml,0.794U/ml,0.62U/ml;BG的米氏常數(shù)和最大反應(yīng)速率分別為3.83 g/L和0.87μmol/min/ml;CMCaseⅠ和CMCaseⅡ的米氏常數(shù)分別為46.7g/L和7.92g/L,最大反應(yīng)速率分別為5.7μmol/min/ml和1.46μmol/min/m