納豆激酶分離、純化及其酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、血栓性疾病是一種危害人類健康的重大疾病,每年因血栓性疾病致死的人數(shù)約占世界總死亡數(shù)的四分之一。而目前上臨床使用的溶栓制劑存在諸多缺點(diǎn),如:價(jià)格昂貴、半衰期短、穩(wěn)定性差、易引發(fā)出血等。因此,研究開發(fā)新型溶栓制劑迫在眉睫。
　　納豆是一種日本傳統(tǒng)的發(fā)酵食品,經(jīng)研究含有大量的生物活性物質(zhì),具有抗栓、降血壓、抗菌、預(yù)防癌癥等多種生理功能,但發(fā)酵成熟的納豆因其具有特殊的氨味而不被大多數(shù)人所接受。選取合適的發(fā)酵底物,優(yōu)化發(fā)酵條件,開發(fā)新的產(chǎn)品

2、是十分必要的。納豆激酶是納豆發(fā)酵過程中產(chǎn)生的一種高效血栓溶解酶,來源于傳統(tǒng)的發(fā)酵食品,生產(chǎn)工藝相對(duì)簡(jiǎn)單,因?yàn)閮r(jià)格低廉,且溶栓性能良好,很有希望發(fā)展成為新一代溶栓藥物。
　　本論文選取花生作為發(fā)酵底物,對(duì)納豆花生發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,研究粗酶液的抑菌性能以及對(duì)納豆激酶進(jìn)行分離純化和酶學(xué)性質(zhì)的研究,最終所得結(jié)果如下:
　　1.通過單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn),確定納豆花生最佳發(fā)酵條件為:蔗糖添加量2％,NaCl添加量1%,接種量2%,含水量

3、35%,發(fā)酵溫度37℃,發(fā)酵時(shí)間24h,在最佳發(fā)酵條件下的產(chǎn)酶量為2725U/g(濕重),具有較高的納豆激酶活性,且發(fā)酵成熟的納豆花生不但沒有氨味,具有一種花生所特有的香味,能被大多數(shù)人所接受。
　　2.采用牛津杯法研究發(fā)酵粗酶液對(duì)常見指示菌的抑制情況,其中對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌、變形桿菌及根霉、青霉和曲霉抑制效果最為明顯。
　　3.采用硫酸銨分級(jí)鹽析、離子交換層析和凝膠過濾層析對(duì)納豆激酶進(jìn)行分離純化,結(jié)果表明

4、:25%和60%飽和度的硫酸銨對(duì)除去雜質(zhì)蛋白和沉淀納豆激酶作用最為明顯,最終純化倍數(shù)為33.19,回收率為12.39%,SDS-PAGE電泳檢測(cè)為單一蛋白條帶。
　　4.對(duì)納豆激酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步的研究,結(jié)果表明:納豆激酶的最適反應(yīng)溫度為55℃,最適反應(yīng)pH為8.5,納豆激酶沒有明顯的金屬離子激活劑,大多數(shù)金屬離子不同程度的抑制其活性,Cu2+和Hg2+抑制作用最為明顯,EDTA、DTT和SDS對(duì)酶活沒有明顯的影響,PMSF能