納豆激酶分離純化工藝與緩釋片劑的研究.pdf

1、本課題以新一代溶栓物質(zhì)納豆激酶為模型藥物，對(duì)納豆激酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)、緩釋片的制備及其穩(wěn)定性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。 采用TAME法作為納豆激酶活性的測(cè)定方法，操作簡(jiǎn)單、快速，在納豆激酶的濃度范圍為0.015-0.25mg/ml內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度較高，重現(xiàn)性好。 對(duì)納豆激酶的分離純化進(jìn)行了研究，納豆激酶發(fā)酵液的粗提物經(jīng)Superdex 75凝膠層析和PAGE電泳純化，可得到納豆激酶的純品，經(jīng)SDS-PAGE電泳檢驗(yàn)為單一

2、色帶，分子量為28kDa。 研究了納豆激酶的酶學(xué)性質(zhì)，在30℃以下，納豆激酶的活性能較好地保持，當(dāng)溫度高于40℃時(shí)，酶活開(kāi)始下降，表明溫度對(duì)納豆激酶的活性有顯著影響；納豆激酶的最適穩(wěn)定pH為6-10，而在pH<4時(shí)，納豆激酶很容易失活，表明納豆激酶在酸性條件下不穩(wěn)定。 考察了影響納豆激酶酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的因素，納豆激酶以TAME為底物時(shí)的米氏常數(shù)(Km)為35.47mmol/L，最適反應(yīng)溫度為37℃，最適反應(yīng)pH為8.0。

3、 本課題選用HPMC、骨架材料A為骨架材料制備了能在體外持續(xù)釋放12h的納豆激酶緩釋片，對(duì)影響緩釋片釋放的因素：骨架材料和稀釋劑的種類及用量進(jìn)行了考察。通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)處方進(jìn)行優(yōu)化，得到了優(yōu)選處方。體外釋放機(jī)理研究結(jié)果表明，納豆激酶緩釋片的體外釋放行為符合威布爾方程。 納豆激酶緩釋片穩(wěn)定性影響因素試驗(yàn)表明，強(qiáng)光照射對(duì)納豆激酶緩釋片無(wú)顯著影響；高濕度會(huì)導(dǎo)致片劑外觀的改變和釋放度的變化。加速試驗(yàn)(25℃)表明，25℃長(zhǎng)期儲(chǔ)

4、藏會(huì)影響納豆激酶緩釋片的釋放度和活性，提示納豆激酶緩釋片宜低溫保存。研究表明，納豆激酶原料的臨界相對(duì)濕度為82.30％，納豆激酶緩釋片的臨界相對(duì)濕度為83.63％，確定了納豆激酶生產(chǎn)和儲(chǔ)藏的濕度條件。 本課題對(duì)新型溶栓物質(zhì)——納豆激酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)、緩釋片的制備及其穩(wěn)定性進(jìn)行了系統(tǒng)研究，目前尚未見(jiàn)關(guān)于納豆激酶口服緩釋制劑的報(bào)道。本課題的研究結(jié)果為納豆激酶緩釋片的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)，同時(shí)也為生物技術(shù)藥物口服緩釋制劑的