仿刺參腸道組織多肽的制備及抗氧化活性研究.pdf

1、本課題以仿刺參腸道組織為原料，首先對其營養(yǎng)成分進(jìn)行測定，繼而選用單因素法及響應(yīng)面法對木瓜、風(fēng)味還有復(fù)合蛋白酶這三種蛋白酶進(jìn)行酶解工藝優(yōu)化。對得到的不同分子量肽段的梯級肽進(jìn)行化學(xué)抗氧化性研究及細(xì)胞損傷保護(hù)作用，最后以得率和活性為目的分離純化多肽。
　　主要研究內(nèi)容如下：
　　1.仿刺參腸道組織基本營養(yǎng)成分的測定
　　仿刺參腸道組織作為海參加工過程中的副產(chǎn)品，蛋白含量豐富，其粗蛋白含量達(dá)到63.056g/100g?？勺鳛橹?/p>

2、備多肽的原材料。
　　2.仿刺參腸道組織酶解工藝條件優(yōu)化
　　首先綜合考慮生產(chǎn)可行性、產(chǎn)品安全性、產(chǎn)品風(fēng)味鮮香等因素，篩選蛋白酶的種類，以酶解時間、酶解溫度及加酶量三個因素對酶解條件進(jìn)行優(yōu)化，利用響應(yīng)面法確定最佳酶解工藝條件。最后以木瓜蛋白酶在溫度50.10℃、時間2.84h、加酶量2.639萬U條件下實際水解度達(dá)到41.82％。
　　本實驗采用的三種外源中性蛋白酶，結(jié)合仿刺參腸道組織中自身溶解酶，形成的多酶體系，結(jié)果

3、表明其酶解工藝條件優(yōu)化合理有效，在安全的基礎(chǔ)上不僅提高了水解度，而且得到了顏色鮮亮狀態(tài)澄清均勻且風(fēng)味鮮香濃郁的酶解液，其可利用作為開發(fā)風(fēng)味獨特的功能性食品。
　　3.梯級肽的分離制備及活性研究
　　本實驗通過優(yōu)化超濾的步驟，采用梯度稀釋法，木瓜蛋白酶為活性酶，分離仿刺參腸道組織的酶解液。結(jié)果表明經(jīng)過四次超濾，小于該膜包的多肽已基本濾過完全，達(dá)到了分離純化的目的。實驗共得到四個分子量大小范圍的多肽，即小于650、650～100

4、0、1000～10000及大于10000 u這4個肽段的多肽，命名為T3、T2、T1、T0，其含量分別為95.32%、2.57%、1.70%、0.41%。
　　在對T1、T2、T3的化學(xué)抗氧化性的測定中，結(jié)果顯示：T1、T2、T3都具備非常不錯的清除DPPH自由基，抗超氧陰離子以及清除羥自由基的能力，且在一定范圍內(nèi)，樣品的清除即抗化學(xué)氧化能力的大小與濃度呈正相干。其中，T3清除 DPPH自由基及抗超氧陰離子能力優(yōu)于T1及T2，而抗

5、羥基自由基能力T3與T2的抑制能力相當(dāng)并高于T1。
　　對分離得到的仿刺參梯級肽進(jìn)行原代巨噬細(xì)胞或氧化氫損傷保護(hù)能力檢測，通過過建立H2O2損傷原代巨噬細(xì)胞模型，選取H2O2的濃度為160μmol/L，利用MTT法檢測各肽段樣品對原代巨噬細(xì)胞的H2O2損傷保護(hù)作用，其結(jié)果表明，各肽段樣品均具有明顯的細(xì)胞損傷保護(hù)能力，其中T3肽段保護(hù)效果更佳。
　　4.仿刺參腸道組織多肽純化及分析
　　本實驗利用大孔吸附樹脂層析法，對超

6、濾所得到的T3肽段進(jìn)行的進(jìn)純化分離，并對分離的組分進(jìn)行抗氧化性檢測，測定其分別清除DPPH自由基和超氧陰離子的能力。T3大孔吸附樹脂層析分離所得5個成分即F1、F2、F3、F4和F5，含量分別為5.657%、29.032%、16.543%、32.862%、15.682%，通過測定清除自由基能力及得率綜合分析，選用F2作為進(jìn)一步分離純化。
　　本實驗通過高速逆流色譜，對大孔吸附樹脂分離所得的F2組分進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化，用于高速逆流