海蜇膠原多肽的制備及抗氧化性研究.pdf

1、膠原多肽是由膠原蛋白或明膠酶解得到的多肽混合物，由于膠原多肽有著優(yōu)良的物理特性和生理活性，因此在食品行業(yè)和化妝品行業(yè)有著廣泛的應(yīng)用前景。
　　 本文以腌制海蜇為原料，采用胃蛋白酶酶解法制取膠原蛋白，對(duì)提取的膠原蛋白進(jìn)行了一系列理化性質(zhì)研究。雙酶復(fù)合法酶解制取膠原多肽，凝膠柱層析法對(duì)膠原多肽進(jìn)行分離純化，測(cè)定相對(duì)分子量，收集各級(jí)組分，測(cè)定了其體內(nèi)外抗氧化活性。
　　 結(jié)果如下:
　　 1.海蜇膠原提取
　　

2、 以乙酸為溶劑，采用胃蛋白酶對(duì)海蜇進(jìn)行酶解提取，用單因素和正交試驗(yàn)方法，對(duì)酶解工藝的主要因素進(jìn)行分析，得到最佳工藝條件:乙酸濃度0.5mol/L、蛋白酶添加量為80u/g、酶解時(shí)間36h、料液比2∶3，在此工藝下的提取率是21.32％。最佳鹽析條件是:1mol/L氯化鈉4℃下鹽析24h。
　　 2.海蜇膠原蛋白的理化性質(zhì)研究
　　 通過氨基酸分析、紫外光譜和紅外光譜分析，海蜇膠原符合典型膠原蛋白的特性;溫度、pH、貯存時(shí)

3、間都對(duì)膠原蛋白的黏度有較大影響;提取的海蜇膠原的熱變性溫度約為27.5℃;乳化活力指數(shù)EAI是10.45m2/g，乳化穩(wěn)定性較差，隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，乳化穩(wěn)定性急劇的下降;起泡性和泡沫穩(wěn)定性分別為73％和56％;等電點(diǎn)為5.4。
　　 3.海蜇膠原多肽的酶解工藝研究
　　 4種酶的最佳酶解工藝:胃蛋白酶酶底比40u/g，pH2，溫度35℃，酶解時(shí)間7h;3942中性蛋白酶酶底比50u/g，pH7.0，酶解溫度50℃，酶解時(shí)間

4、7h;胰蛋白酶酶底比50u/g，pH8.5，溫度60℃，酶解時(shí)間5h;木瓜蛋白酶酶底比60u/g，pH7.0，溫度50℃，酶解時(shí)間7h。最佳的水解酶是胰蛋白酶。
　　 復(fù)合酶水解的最佳工藝（:）3942中性蛋白酶與木瓜蛋白酶質(zhì)量比1∶1，先用3942中性蛋白酶水解，再用木瓜蛋白酶水解;3942中性蛋白酶與胰蛋白酶質(zhì)量比1∶2，兩酶混合水解;木瓜蛋白酶與胰蛋白酶質(zhì)量比3∶1，先用木瓜蛋白酶水解，再用胰蛋白酶水解。最佳的復(fù)合酶是木瓜

5、蛋白酶與胰蛋白酶3∶1復(fù)合，先后水解。復(fù)合酶的水解效果要比單酶水解好。
　　 4.海蜇膠原多肽的凝膠過濾分離
　　 SephadexG-25對(duì)膠原多肽進(jìn)行分離，可以得到PSCG25-Ⅰ和PSCG25-Ⅱ兩個(gè)組分，含量分別為45.7％、35.8％。主峰柱保留時(shí)間分別為220min、302min，其分子量為4.696KDa、1.171KDa。
　　 SephadexG-50對(duì)海蜇膠原多肽進(jìn)行分離，可以得到PSCG50

6、-Ⅰ和PSCG50-Ⅱ兩個(gè)組分，含量分別為35.2％和56.25％，主峰柱保留時(shí)間為128min、247min，分子量為6.360KDa、1.795KDa。
　　 SephadexG-100對(duì)海蜇膠原多肽進(jìn)行分離，得到PSCG100-Ⅰ和PSCG100-Ⅱ兩個(gè)組分，含量分別為21.67％和33.33％，主峰柱保留時(shí)間為168min、272min，分子量為10.383KDa、6.239KDa。
　　 5.海蜇膠原多肽的體外

7、抗氧化性研究
　　 清除自由基實(shí)驗(yàn)表明:海蜇膠原多肽具有較強(qiáng)的清除自由基能力，且呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。PSCG25-Ⅱ清除超氧陰離子、羥自由基和DPPH·自由基的能力最強(qiáng)，次之是PSCG50-Ⅱ。
　　 脂質(zhì)過氧化實(shí)驗(yàn)表明:多肽各級(jí)組分能不同程度的抑制Fe2+和Vc誘發(fā)的小鼠肝組織MDA生成，這表明海蜇膠原多肽的各級(jí)組分具有清除·OH的顯著作用;能不同程度的抑制紅細(xì)胞氧化溶血，降低線粒體腫脹，說明具有清除H2O2及其對(duì)

8、抗生物膜過氧化的顯著作用?？怪|(zhì)過氧化效果最佳的組分是PSCG25-Ⅱ和PSCG50-Ⅱ。
　　 6.海蜇膠原多肽的體內(nèi)抗氧化研究
　　 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，海蜇膠原多肽可以顯著的提高受試小鼠血清、心、肝、腎組織中總抗氧化能力和超氧化物岐化酶、谷胱甘肽過氧化物酶的活力，而顯著的降低受試小鼠血清、心、肝、腎組織中丙二醛的含量。這表明膠原多肽能減低小鼠脂質(zhì)過氧化損傷和增強(qiáng)抗氧化能力。隨著濃度的增大，小鼠體內(nèi)抗氧化能力增強(qiáng)，說明