銀杏多肽的提取、分離純化及體內(nèi)抗氧化活性研究.pdf

1、本研究以銀杏為主要原料，利用中性蛋白酶與風味蛋白酶分步水解，制備出銀杏多肽，再通過不同孔徑的過濾膜分離純化銀杏多肽，并且，對不同分子量段的多肽的物性進行研究，通過小鼠體內(nèi)抗氧化試驗檢驗不同分子量間多肽的抗氧化能力，以及小鼠免疫組織的免疫指數(shù)。
　　首先，將銀杏粉用中性蛋白酶、風味蛋白酶、堿性蛋白酶、胰蛋白酶及木瓜蛋白酶酶解，確定水解度(DH)最優(yōu)的蛋白酶，根據(jù)水解度的結(jié)果，選擇中性蛋白酶參加第一步酶解，第二步酶解選用風味蛋白酶。通

2、過單因素試驗，研究了第一步酶解過程中溫度、底物添加量、初始pH值及酶添加量等因素對水解度的影響。在此基礎上，采用四因素三水平正交試驗對銀杏粉第一步酶解條件進行優(yōu)化。結(jié)果表明，最佳的酶解條件為：底物濃度0.02 g/mL、初始pH7.0、反應溫度是45℃和中性酶添加量為1.8 mg/mL。再通過單因素實驗，研究第二步酶解過程中溫度，初始pH值，反應時間及風味蛋白酶濃度等因素對水解度的影響。在此基礎上，采用四因素三水平正交試驗對酶解條件進行

3、優(yōu)化。結(jié)果表明，酶添加量為9.0 mg/mL、初始pH7.0、反應溫度50℃和反應時間6h，依上述條件進行驗證試驗所得水解度為25.03%。
　　利用膜分離技術對酶解液分離純化，首先利用高速離心去除蛋白質(zhì)和淀粉，再選擇分子量分為20、10及2.5 kDa的超濾膜進行分離純化，再使用納濾膜去除小分子物質(zhì)，得到不同分子量的肽段，分別為>20、10～20、2.5～10和<2.5 kDa的多肽，分別檢測多肽液內(nèi)可溶性蛋白含量為0.69、0

4、.13、3.67和2.74%，而未膜分離的酶解液可溶性蛋白含量為8.76%。物性研究表明10～20 kDa的銀杏多肽液起泡性最強，酶解液的起泡穩(wěn)定性最強，2.5～10 kDa之間的銀杏多肽吸油性最佳。
　　通過小鼠體內(nèi)評價得知，銀杏多肽的體內(nèi)抗氧化效果普遍優(yōu)于對照組和Vc灌胃組。分子量<2.5 kDa的銀杏多肽抗氧化能力極顯著，對血液、肝組織、腎組織和心臟組織的T-AOC、GSH-PX及SOD活力有促進作用，提高抑制羥自由基能力和