茶渣多肽制備及其抗氧化活性研究.pdf

1、多肽是一類由氨基酸構(gòu)成，但又不同于蛋白質(zhì)的具有蛋白質(zhì)特性的中間產(chǎn)物。具有抗氧化性的多肽類物質(zhì)稱為抗氧化(活性)肽。與蛋白質(zhì)相比，活性肽具有良好的理化性質(zhì)和水合性質(zhì)；作為基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)，活性肽的生物利用率高，比蛋白質(zhì)更易吸收；同時具有調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能的功效，是原蛋白質(zhì)及其所組成的氨基酸所不具備的。本試驗以綠茶茶渣為原料，從中提取蛋白并采用酶法制備活性肽.主要研究結(jié)果如下：
　　 ⑴試驗所用茶渣中多酚含量達(dá)10.7％，蛋白含量達(dá)23.

2、055％，咖啡堿含量0.1％。為進(jìn)一步提高茶渣蛋白的得率，對茶渣進(jìn)行了前處理去除殘留多酚。通過單因素試驗證明最佳工藝為：液料比40，溫度70℃，浸提時間15 min，浸提次數(shù)為1次，在此條件下，多酚的浸出率為67.3％。
　　 ⑵比較醇溶法以及堿溶法提取茶渣蛋白兩種方法.并在此基礎(chǔ)上，分析離子強(qiáng)度劑NaCl對蛋白得率的影響。通過正交試驗表明醇溶法最佳工藝為：乙醇濃度40％、pH12，溫度70℃，液料比40、時間60 min，在此

3、條件下得率達(dá)19.784％；堿溶最佳工藝為：pH12、溫度80℃、液料比50、時間60min，在此條件下得率達(dá)33.496％，高于醇溶法13.712％。在堿溶基礎(chǔ)上，離子強(qiáng)度劑-NaCl會抑制蛋白的浸出，而且隨著其濃度的增加，抑制率提高。采用堿溶法提取的茶渣粗蛋白純度為41.0％。
　　 ⑶在研究荼渣蛋白提取方法的基礎(chǔ)上，分別以酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶以及復(fù)合蛋白酶水解茶渣粗蛋白制備茶渣多肽，并對多肽的羥自由基清除能力

4、進(jìn)行考察。通過優(yōu)化后的羥自由基清除能力的測定方法為：依次加入0.5 mL10 mmol/L水楊酸-乙醇溶液、0.5 mL10 mmol/L七水合硫酸亞鐵溶液、0.5 mL3.0 mg/mL樣液(控制pH7.0)、8mL蒸餾水，最后加入0.5 mL10 mmol/L H2O2啟動Fenton反應(yīng)，搖勻后于室溫即25℃靜置20 min，以蒸餾水作為參比，本地對照剔除水楊酸，于510 nm處測定其吸光度。
　　 ⑷在各自最適條件下及相

5、同的加酶量(1000 U/g)環(huán)境下比較了酸性蛋白酶、中性蛋白酶以及復(fù)合蛋白酶。試驗顯示：復(fù)合蛋白酶水解效果最好，其清除能力為16.9％；酸性蛋白酶的水解效果較好為12.1％；中性蛋白酶效果最差為9.9％。
　　 ⑸通過單因素試驗對堿性蛋白酶和復(fù)合蛋白酶的水解工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果證明：復(fù)合蛋白酶的效果最好，其最佳水解工藝條件為粗蛋白液濃度0.5％、加酶量600U/g、溫度55℃、pH8.0、水解5 h，在此條件下，多肽對羥自由

6、基的清除能力達(dá)27.3％；堿性蛋白酶的效果也較好，其最佳工藝為蛋白液濃度0.5％、加酶量400 DU/g、pH8.5、溫度50℃、時間1.0 h，在此條件下，多肽對羥自由基的清除能力達(dá)25.3％，與前者的清除能力沒有顯著差異，但用時少4 h。
　　 ⑹利用堿性蛋白酶作為酶源制得茶渣多肽粗品中含有蛋白質(zhì)、多肽、游離氨基酸分別為28.4％，11.0％，1.5％，其對羥自由基的半清除率SC50為8.432 mg/mL，相同條件下Vc的