萬(wàn)壽菊殘?jiān)某煞址蛛x與抗癌活性研究.pdf

1、萬(wàn)壽菊，為菊科萬(wàn)壽菊屬中最有名的一類植物，主要被用于提取葉黃素。本課題以萬(wàn)壽菊殘?jiān)鼮檠芯繉?duì)象，采用離線二維制備型高效液相色譜法，結(jié)合實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)，從提取工藝的選擇、二維正交高效液相色譜方法的建立、活性單體化合物的制備及抗癌活性藥效學(xué)評(píng)價(jià)這四個(gè)方面展開研究，旨在建立一種生物活性指導(dǎo)下的活性單體化合物的分離方法，為新藥開發(fā)提供有價(jià)值的有效信息，奠定一定的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　通過(guò)考察影響萬(wàn)壽菊提取效果的因素，如提取次數(shù)、提取時(shí)間、

2、提取溫度和料液比等，對(duì)萬(wàn)壽菊提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，從而得到最適合萬(wàn)壽菊殘?jiān)崛〉墓に嚄l件：以乙醇為溶劑，料液比1：5，60℃下回流提取3次，每次120 min。
　　對(duì)按最佳工藝條件提取得到的萬(wàn)壽菊殘?jiān)继嵛镞M(jìn)行一維液相色譜分離。運(yùn)用正相Innoval silica柱和反相DAISO C18進(jìn)行初步的一維分離分析，最終選取了正相的分離方式。在一維制備中，共得到了9個(gè)粗組分，為后續(xù)的二維分離起到了提高效率的作用。在分離過(guò)程中結(jié)合實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)

3、記細(xì)胞分析技術(shù)，篩選得到3個(gè)抗腫瘤活性組分。
　　進(jìn)一步對(duì)3個(gè)活性組分進(jìn)行二維色譜分離。通過(guò)考察不同色譜柱對(duì)樣品的分離情況，從而建立了一個(gè)由Innoval silica柱和Diol柱所組成的離線二維色譜分離系統(tǒng)。該系統(tǒng)對(duì)萬(wàn)壽菊殘?jiān)械狞S酮類物質(zhì)呈現(xiàn)出較好的保留和選擇性。在二維制備中，得到了8個(gè)化合物，純度都在96％以上。結(jié)合核磁數(shù)據(jù)對(duì)其進(jìn)行表征，結(jié)果顯示，主要為黃酮類以及有機(jī)酸類化合物，其中化合物3（6-羥基山萘酚）是首次從萬(wàn)壽菊

4、屬植物中被分離得到。
　　對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行抗癌活性篩選，結(jié)果表明，化合物2和3對(duì)于A549和Hep-G2細(xì)胞均有一定的抑制作用，化合物4和5能顯著抑制A549細(xì)胞活性，而對(duì)Hep-G2細(xì)胞的抑制作用不明顯。對(duì)于得率最高的化合物5（槲皮萬(wàn)壽菊素）進(jìn)行進(jìn)一步的安全性評(píng)價(jià)和體內(nèi)活性驗(yàn)證研究。急毒試驗(yàn)結(jié)果顯示，槲皮萬(wàn)壽菊素在給藥劑量0.63 g/kg-10.0 g/kg范圍內(nèi)，小鼠生活狀態(tài)良好，無(wú)死亡現(xiàn)象，表明該活性成分安全有效。采

5、用Lewis肺癌和H22肝癌小鼠模型，通過(guò)考察對(duì)小鼠的常規(guī)生理指標(biāo)的影響、對(duì)實(shí)體瘤的抑制作用來(lái)評(píng)價(jià)槲皮萬(wàn)壽菊素的抗癌活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在給藥劑量為180 mg/kg、服藥天數(shù)為10天時(shí)，其對(duì)小鼠Lewis肺癌和H22肝癌模型具有一定的療效，抑瘤率分別達(dá)到47.72%和46.27%，接近于陽(yáng)性藥物環(huán)磷酰胺的療效。
　　總之，本課題中所構(gòu)建生物活性指導(dǎo)下的離線二維色譜分離系統(tǒng)在快速、有效地獲得萬(wàn)壽菊殘?jiān)械目拱┗钚曰衔锷掀鸬搅酥陵P(guān)