cRGD-siVEGFR2分子抑制血管生成的體外藥效學(xué)研究.pdf

1、分類號(hào)UDC密級(jí)編號(hào)角方霜糾碩士學(xué)位論文cRGDsiVEGFR2分子抑制血管生成的體外藥效學(xué)研究Aninvitrostudyontheanti—angiogenicactivityofcRGDsiVEGFI匕molecule導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型論文提交日期覃乙芯季愛民教授藥劑學(xué)學(xué)術(shù)型2017年5月碩士學(xué)位論文cRGDsiVEGFR2分子抑制血管生成的體外藥效學(xué)研究碩士研究生：覃乙芯指導(dǎo)教師：季愛民教授摘要腫瘤生長(zhǎng)依賴于新血管生成，當(dāng)

2、腫瘤組織擁有獨(dú)立的血管供應(yīng)，腫瘤細(xì)胞就獲得了轉(zhuǎn)移擴(kuò)散的能力。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)作為一項(xiàng)新興技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于惡性腫瘤的基因治療研究領(lǐng)域。本課題設(shè)計(jì)合成cRGDsiVEGFR2分子，考察分子體外生物學(xué)功能，探討其抑制血管生成的作用效果及作為腫瘤靶向治療藥物的可能性。方法1、原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞模型的建立膠原酶消化法分離提取細(xì)胞，免疫熒光檢測(cè)VIII因子進(jìn)行細(xì)胞鑒定，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD31含量進(jìn)行純度檢測(cè)

3、，并探索最佳的血清饑餓條件。2、cRGDsiRNA分子的合成cRGD通過linker與siRNA正義鏈5’端共價(jià)偶聯(lián)得cRGDsiRNA分子，分別用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)和反相高效液相色譜進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和純度檢測(cè)。3、cRGD。siVEGFR2分子體外功能研究(I)血清穩(wěn)定性研究：siVEGFR2、cRGDsiv】jGFR2、cRGDsiNC分另U與鼠血清混勻孵育，瓊脂糖凝膠電泳后觀察條帶完整性。(2)細(xì)胞毒性研究：1000nM、2000n