連接酶鏈式反應(yīng)快速靈敏的檢測microRNA.pdf

1、MicroRNA (miRNA）在生物體內(nèi)起著重要的調(diào)控作用，對miRNA 生物功能的研究在早期疾病診斷和新藥的開發(fā)方面有著廣泛的應(yīng)用前景，研究簡便、快速、高靈敏和特異性好的miRNA 檢測新方法對miRNA的研究具有重要的意義。本論文中，以miRNA為模板，在納米金上實現(xiàn)了DNA 探針之間的連接，導(dǎo)致納米金的交聯(lián)聚集，從而建立了通過顏色變化檢測miRNA的簡便方法。方法簡單、易操作、無需任何擴增技術(shù)、及昂貴的儀器，通過肉眼觀察即可獲得

2、檢測結(jié)果，因此方便實用。本方法的局限性是無法在納米金上實現(xiàn)連接酶鏈式反應(yīng)（LCR），因此，檢測限受到了限制。在此基礎(chǔ)上，我們以miRNAs 為模板，用T4 RNA ligase 2 選擇性的連接DNA 探針，引發(fā)LCR，用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)分離、檢測，建立了一種簡單、快速、靈敏并且選擇性較好的檢測miRNA的方法。本方法檢測限約為0.7 pmol/L (3 σ，n = 7)，產(chǎn)物的灰度值在2.0 pmol/L ～2.0nmol/L的濃度