人臍帶MSCs源microvesicles的分離及特異microRNAs檢測(cè).pdf

1、背景：微粒體(Microvesicles，MVs)是多種細(xì)胞釋放在微環(huán)境中的質(zhì)膜囊泡。近年來(lái)人們關(guān)注到細(xì)胞源MVs作為細(xì)胞間一個(gè)新的分子通訊介質(zhì)，能夠轉(zhuǎn)運(yùn)大量生物活性分子。
　　 目的：分離人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)源MVs，檢測(cè)特異性microRNAs表達(dá)，探討MSCs潛在的細(xì)胞通訊方式。
　　 方法
　　 1.組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)人臍帶MSCs，進(jìn)行傳代擴(kuò)增；

2、從人臍帶MSCs條件培養(yǎng)基(conditioned medium，CM)中提取MVs。
　　 2.對(duì)第3代MSCs細(xì)胞標(biāo)記CD29-PE、CD44-APC、CD34-FITC、CD45-PerCP，流式細(xì)胞儀分析鑒定。
　　 3.TRIzol法提取細(xì)胞人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞及MVs中總RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)miR-100和miR-21的表達(dá)水平，以U6作為內(nèi)參對(duì)照。
　　 結(jié)果
　　 1.細(xì)胞

3、形態(tài)呈長(zhǎng)梭形，原代培養(yǎng)12d、傳代培養(yǎng)4d細(xì)胞融合度達(dá)90％，細(xì)胞排列成漩渦狀。
　　 2.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞不表達(dá)造血細(xì)胞標(biāo)志CD34(0.87%)、CD45(1.28%)，強(qiáng)表達(dá)β1-整合素CD29(96.68%)、基質(zhì)受體CD44(92.78%)。
　　 3.miR-100在正常培養(yǎng)MSCs、MVs、凍存MSCs中均能檢測(cè)到表達(dá)。其中miR-100在MVs和正常培養(yǎng)MSCs中表達(dá)量無(wú)明顯差異(P>0.05)，miR

4、-100在凍存MSCs中表達(dá)量顯著低于正常培養(yǎng)MSCs(P<0.05)。
　　 4.miR-21在正常培養(yǎng)MSCs、MVs、凍存MSCs中均能檢測(cè)到表達(dá)。其中miR-21在MVs中表達(dá)量較正常培養(yǎng)MSCs中明顯提高(P<0.05)，miR-21在凍存MSCs中表達(dá)量顯著低于正常培養(yǎng)MSCs(P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.從人臍帶組織中成功分離培養(yǎng)MSCs，收獲大量經(jīng)過(guò)生物學(xué)鑒定的MSCs。