用于修復(fù)放射性腸纖維化的MMP-3基因修飾干細(xì)胞的研究.pdf

1、目前，人類(lèi)腫瘤的發(fā)生率極高，放射治療是其重要的醫(yī)學(xué)治療手段，然而對(duì)于腹腔、盆腔等身體部位，這種治療方式會(huì)產(chǎn)生一定的副作用，一定的輻射強(qiáng)度下會(huì)引發(fā)放射性腸炎，繼而引起腸道內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)成分（ECM）的過(guò)度沉積，發(fā)生放射性纖維化，腸纖維化的發(fā)生和發(fā)展嚴(yán)重影響患者愈后水平和生活質(zhì)量。
　　基質(zhì)金屬蛋白酶3（MMP-3）可以降解 ECM，是重塑組織結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵酶，進(jìn)而修復(fù)腸道組織。然而體內(nèi)的MMP-3表達(dá)十分有限，機(jī)體不能主動(dòng)修復(fù)完全，因而大

2、量表達(dá)MMP-3可以作為放射性腸纖維化修復(fù)實(shí)驗(yàn)研究的靶點(diǎn)。
　　本研究以小鼠軟骨RNA為模板，克隆MMP-3基因，構(gòu)建EGFP標(biāo)記的MMP-3慢病毒表達(dá)載體（LV-MMP-3-EGFP），修飾小鼠胚胎干細(xì)胞（ES）和骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）；給予10GyX射線(xiàn)照射成纖維細(xì)胞（3T3），構(gòu)建纖維化模型，將轉(zhuǎn)染后的干細(xì)胞與纖維化細(xì)胞共培養(yǎng)，熒光顯微鏡下觀察GFP綠色熒光蛋白，及共培養(yǎng)后纖維化細(xì)胞的形態(tài)變化，并用Weste

3、rn Blot檢測(cè)MMP-3和TGF-β蛋白表達(dá)。
　　現(xiàn)已成功構(gòu)建慢病毒表達(dá)載體LV-MMP-3-EGFP，且成功轉(zhuǎn)染GP2-293T細(xì)胞，ES細(xì)胞和BM-MSCs細(xì)胞；病毒感染的ES細(xì)胞中MMP-3蛋白表達(dá)高于對(duì)照組；病毒感染的ES細(xì)胞與3T3細(xì)胞共培養(yǎng)后，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中TGF-β蛋白表達(dá)無(wú)顯著變化；病毒感染的BM-MSCs細(xì)胞與10 Gy X射線(xiàn)照射后的3T3細(xì)胞共培養(yǎng)后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞密度發(fā)生變化。此結(jié)果表明LV-