獼猴MHC-DPB1基因外顯子2多態(tài)性研究.pdf

1、不同種群的獼猴(Macaca mulatta) MHC基因的差異性，很大程度上影響了用其作為動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的穩(wěn)定性、可靠性和可重復(fù)性。因此清晰的了解獼猴免疫遺傳學(xué)背景，對(duì)于運(yùn)用該種群開展各項(xiàng)研究是非常重要的，將為它們?cè)谏镝t(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用及其遺傳資源的保護(hù)提供重要的科學(xué)依據(jù)。本文以四川獼猴的7個(gè)群體為研究對(duì)象，采用變性梯度凝膠電泳(Denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE)和克隆測(cè)

2、序技術(shù)分析了217個(gè)四川野生獼猴MHC-DPB1位點(diǎn)的exon2的多態(tài)性，獲得如下結(jié)果：
　　 1)共檢測(cè)到59個(gè)Mamu-DPB1等位基因，其中有52個(gè)為本研究中首次發(fā)現(xiàn)的新等位基因；從整個(gè)大獼猴群體（217個(gè)個(gè)體）來看，等位基因頻率最高的是Mamu-DPB1*04(0.068)；單獨(dú)從不同地理群體來看，最高等位基因頻率分別為：小金-DPB1*30(0.081)，黑水-DPB1*04(0.103)，巴中-DPB1*32(0.1

3、07)，漢源-DPB1*23(0.071)，九龍-DPB1*04(0.81)，丹巴-DPB1*04(0.071)，北川-DPB1*04(0.107)；
　　 2)獼猴與食蟹猴MHC-DPB1外顯子2氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，在其中的51個(gè)位點(diǎn)，鑒定出67個(gè)物種特異性的氨基酸殘基。這些殘基中，有39個(gè)為Mamu-DPB1等位基因特異的氨基酸殘基，其中有33個(gè)位于新發(fā)現(xiàn)的52個(gè)Mamu-DPB1等位基因序列中；
　　 3)不同物種

4、來源的DPB1等位基因系統(tǒng)發(fā)生樹(N-J)研究發(fā)現(xiàn)，獼猴和其近緣物種食蟹猴(Macaca fascicularis)的DPB1等位基因間存在跨種多態(tài)(Trans-speciespolymorphism)現(xiàn)象，表明新的等位基因的出現(xiàn)可能是相同或近似自然選擇壓力下趨同進(jìn)化( convergent evolution)的結(jié)果；
　　 4)Nei-Gojibori-p計(jì)算出來單個(gè)群體平均距離由大到小為：漢源＞小金＞九龍＞北川＞丹巴＞黑水

5、＞巴中，這反映由氨基酸差異造成的平均遺傳距離漢源最高，巴中最低。由Kimura-2-parameters計(jì)算出來各個(gè)群體平均遺傳距離由大到小為：漢源＞小金＞巴中＞北川＞九龍＞黑水＞丹巴，這反映出各群體內(nèi)部遺傳多樣性漢源最高，丹巴最低。
　　 以上結(jié)果表明，獼猴MHC-DPB1基因外顯子2區(qū)域具有較高的多態(tài)性，且MHC-DPB1基因在中國獼猴群體和以前作為主要研究對(duì)象的印度獼猴群體間具有較大的差異。因此，深入分析各地理分布群之間M