家蠶JAK-STAT通路主要相關(guān)基因及其對病毒、微孢子蟲感染應(yīng)答研究.pdf

1、JAK/STAT信號通路是一條多種細胞因子共用的信號傳導(dǎo)途徑，其相關(guān)蛋白及基本功能在生物體中保守。為了鑒定家蠶JAK/STAT信號通路組成原件，在電子克隆的基礎(chǔ)上，通過RT-PCR獲得家蠶JAK/STAT信號通路的主要相關(guān)基因;利用在線軟件對相關(guān)蛋白進行結(jié)構(gòu)域分析，并預(yù)測家蠶JAK/STAT信號通路主要相關(guān)基因的功能。通過基于microarray數(shù)據(jù)庫或qPCR分析各基因的組織表達特征。克隆的家蠶JAK/STAT信號通路相關(guān)基因主要包括

2、:BmSTAT，BmHOP，BmSOCS2，BmSOCS5A,BmSOCS5B,BmSOCS6,BmDRK,Bmken,BmPIAS1,BmPIAS2以及BmPI3K，但沒有能克隆到果蠅Upd1、Upd2和Upd3的同源體基因。序列分析顯示BmHOP具CRD_FZ、Kringle、轉(zhuǎn)膜區(qū)域和PKc超家族蛋白激酶催化結(jié)構(gòu)域TyrKc;BmSTAT有2種亞型，均具SH2、STAT_bind、STAT_int和STAT_alpha結(jié)構(gòu)域;在克

3、隆的BmSOCS家族的3個基因中，BmSOCS2A和BmSOCS6A具典型的SH2和SOCS結(jié)構(gòu)域;BmDRK由SH3和SH2兩種結(jié)構(gòu)域形成了SH3-SH2-SH3串聯(lián)結(jié)構(gòu);BmKen存在BTB和鋅指結(jié)構(gòu)域，BmPIAS1和BmPIAS2具有LCR結(jié)構(gòu)域，BmPI3K具有兩個SH2結(jié)構(gòu)域。相關(guān)蛋白的保守結(jié)構(gòu)域分析顯示，在家蠶JAK/STAT信號通路中，BmHOP是JAK激酶的一種，可以磷酸化BmSTAT轉(zhuǎn)錄因子，激活靶基因轉(zhuǎn)錄;BmSO

4、CS、Bmken、BmPIAS1以及BmPIAS2對JAK/STAT通路起負反饋作用。
　　 實時定量PCR(Real-TimePCR)結(jié)果顯示BmSOCS6mRNA豐度在家蠶精巢中最高，血細胞相對較低。用原核表達的重組BmSOCS6制備鼠抗BmSOCS6多克隆抗體，細胞定位結(jié)果顯示BmSOCS6主要定位在BmN細胞的細胞質(zhì);免疫組化結(jié)果顯示BmSOCS6精巢、卵巢中均有表達，在生精囊和卵巢管也有表達。
　　 為了探討家

5、蠶JAK/STAT途徑抗病毒和微孢子蟲感染的免疫應(yīng)答，家蠶感染BmNPV，后，Real-TimePCR檢測BmSTAT的轉(zhuǎn)錄水平，結(jié)果顯示，感染48、72h后家蠶血液中BmSTAT轉(zhuǎn)錄水平分別提高14、12倍左右;家蠶感染BmCPV、微孢子蟲后，中腸后部組織中BmSTAT轉(zhuǎn)錄水平與對照無明顯差異;家蠶感染BmDNV后，后部中腸中BmSTAT轉(zhuǎn)錄水平提高5倍?？梢酝茰y家蠶JAK/STAT信號通路能應(yīng)答B(yǎng)mNPV和BmDNV感染。研究結(jié)果對