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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.觀察黃精對(duì)自然衰老大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能及端粒酶活性的影響。
2.探討黃精干預(yù)EPCs衰老的可能作用機(jī)制。
方法:取健康SPF級(jí)SD大鼠60只,其中自然衰老大鼠(20月齡)48只,青年大鼠(5月齡)12只。青年大鼠設(shè)為對(duì)照組,衰老大鼠按體重隨機(jī)分為空白組,黃精高、中、低劑量組,每組12只;黃精高、中、低劑量組分別予以4g·kg
2、-1、2g·kg-1、1g·kg-1黃精水煎液灌胃,對(duì)照組和空白組予以等量生理鹽水灌胃,每日1次,連續(xù)12周后取動(dòng)脈血檢測(cè)抗氧化力指標(biāo),即血清總抗氧化力(total-antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽-過氧化物酶(glutathione-peroxidase,GSH-PX)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。采用密度梯
3、度離心法結(jié)合差速貼壁法分離各組大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞,用添加多種生長(zhǎng)因子的全培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、特異性結(jié)合荊豆凝集素-1(ulex europaeus agglutinin,UEA-1)和乙?;兔芏戎鞍祝╝cetylated low density lipoprotein,ac-LDL)的攝取功能來對(duì)EPCs進(jìn)行鑒定。采用四唑鹽(MTT)法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖力,遷移小室檢測(cè)遷移力,體外血管生成試劑盒檢測(cè)成小管功能,實(shí)時(shí)
4、熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測(cè)端粒酶活性。
結(jié)果:
1.與對(duì)照組比較,空白組血清T-AOC、SOD、GSH-Px含量明顯減少,MDA含量增加(P<0.01);與空白組比較,黃精高、中劑量組血清T-AOC、SOD、GSH-Px含量均有增加,MDA含量減少(P<0.05),而黃精低劑量組血清各指標(biāo)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
2.剛分離的大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞呈小圓形,誘導(dǎo)培養(yǎng)第4d可見細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),以紡錘形細(xì)胞為主,
5、培養(yǎng)至第7d可見到明顯的細(xì)胞集落及線狀結(jié)構(gòu)的形成,傳代培養(yǎng)至第2-4周細(xì)胞呈典型的鋪路石樣,第4-8周出現(xiàn)生長(zhǎng)高峰,呈放射狀生長(zhǎng);能吞噬ac-LDL并結(jié)合UEA-1。
3.與對(duì)照組比較,空白組骨髓EPCs功能受損明顯,端粒酶活性降低(P<0.01);與空白組比較,黃精高、中劑量組均可促進(jìn)EPCs的增殖力、遷移力、成小管力和端粒酶活性(P<0.05),而低劑量組對(duì)EPCs功能和端粒酶活性無明顯影響。
結(jié)論:
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