促紅細胞生成素通過PI3K-Akt和Erk1-2信號通路對缺氧缺糖誘導神經(jīng)元凋亡的保護作用.pdf

1、目的：研究Epo對缺氧缺糖神經(jīng)元減少凋亡的保護作用及其相關信號通路機制。
　　方法：乳鼠皮質神經(jīng)元原代分離培養(yǎng)并進行map2免疫熒光鑒定。建立神經(jīng)元OGD損傷模型，流式細胞儀（AnnexinV/PI染色法）檢測細胞凋亡率鑒定模型。加入不同濃度的Epo干預，流式細胞儀檢測各濃度Epo作用下細胞凋亡率，尋找最佳Epo干預濃度。實驗分組：①對照組：正常皮質神經(jīng)元；②模型組：OGD損傷模型；③Epo組：OGD損傷模型+Epo（最佳濃度）；

2、④LY294002組：OGD損傷模型+Epo+LY294002（PI3K-Akt通路阻斷劑）；⑤U0126組：OGD損傷模型+Epo+U0126（Erk1/2通路阻斷劑）。流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率，Rt-PCR檢測各組Bax、Bcl-2的mRNA轉錄水平，Western blot檢測各組Akt、p-Akt、Erk、p-Erk和Bax、Bcl-2及Caspase-3的蛋白表達。
　　結果：1. Epo可以降低神經(jīng)元OGD損傷模型

3、的細胞凋亡率（P<0.05），并且在Epo濃度為12.5U/ml時的保護作用最強（P<0.05）。2. OGD組相較于對照組細胞凋亡率上升（P<0.05）；Bax mRNA、Bcl-2 mRNA轉錄增強（P<0.05）；Akt、Erk、Bcl-2蛋白表達無差異（P>0.05），p-Akt表達下降，p-Erk、Bax和Caspase-3表達上升（P<0.05）。3. Epo組相較于OGD組Bax mRNA轉錄減弱，Bcl-2 mRNA轉錄

4、增強（P<0.05）；Akt、Erk蛋白表達無差異（P>0.05），p-Akt、Bcl-2表達上升，p-Erk、Bax和Caspase-3表達下降（P<0.05）。4. LY294002組相較于Epo組細胞凋亡率上升（P<0.05）；Bax mRNA轉錄增強，Bcl-2 mRNA轉錄減弱（P<0.05）；Akt蛋白表達無差異（P>0.05），p-Akt、Bcl-2表達下降，Bax和Caspase-3表達上升（P<0.05）。5. U01