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文檔簡介
1、目的:研究Epo對缺氧缺糖神經(jīng)元減少凋亡的保護作用及其相關(guān)信號通路機制。
方法:乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)元原代分離培養(yǎng)并進行map2免疫熒光鑒定。建立神經(jīng)元OGD損傷模型,流式細胞儀(AnnexinV/PI染色法)檢測細胞凋亡率鑒定模型。加入不同濃度的Epo干預(yù),流式細胞儀檢測各濃度Epo作用下細胞凋亡率,尋找最佳Epo干預(yù)濃度。實驗分組:①對照組:正常皮質(zhì)神經(jīng)元;②模型組:OGD損傷模型;③Epo組:OGD損傷模型+Epo(最佳濃度);
2、④LY294002組:OGD損傷模型+Epo+LY294002(PI3K-Akt通路阻斷劑);⑤U0126組:OGD損傷模型+Epo+U0126(Erk1/2通路阻斷劑)。流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率,Rt-PCR檢測各組Bax、Bcl-2的mRNA轉(zhuǎn)錄水平,Western blot檢測各組Akt、p-Akt、Erk、p-Erk和Bax、Bcl-2及Caspase-3的蛋白表達。
結(jié)果:1. Epo可以降低神經(jīng)元OGD損傷模型
3、的細胞凋亡率(P<0.05),并且在Epo濃度為12.5U/ml時的保護作用最強(P<0.05)。2. OGD組相較于對照組細胞凋亡率上升(P<0.05);Bax mRNA、Bcl-2 mRNA轉(zhuǎn)錄增強(P<0.05);Akt、Erk、Bcl-2蛋白表達無差異(P>0.05),p-Akt表達下降,p-Erk、Bax和Caspase-3表達上升(P<0.05)。3. Epo組相較于OGD組Bax mRNA轉(zhuǎn)錄減弱,Bcl-2 mRNA轉(zhuǎn)錄
4、增強(P<0.05);Akt、Erk蛋白表達無差異(P>0.05),p-Akt、Bcl-2表達上升,p-Erk、Bax和Caspase-3表達下降(P<0.05)。4. LY294002組相較于Epo組細胞凋亡率上升(P<0.05);Bax mRNA轉(zhuǎn)錄增強,Bcl-2 mRNA轉(zhuǎn)錄減弱(P<0.05);Akt蛋白表達無差異(P>0.05),p-Akt、Bcl-2表達下降,Bax和Caspase-3表達上升(P<0.05)。5. U01
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