促紅細(xì)胞生成素在新生鼠缺氧缺血性腦損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用.pdf

1、背景:新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)系新生兒窒息、缺氧所致的嚴(yán)重并發(fā)癥，病情嚴(yán)重，病死率高，是引起新生兒死亡和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙的主要原因之一。因此深入了解HIE發(fā)病機(jī)制及尋求更有效的治療途徑成為新生兒研究的熱點之一。促紅細(xì)胞生成素(EPO)是重要的造血因子，通過作用于紅系前體細(xì)胞膜表面特異性EPO受體(EPO-R)刺激其增殖、分化及成熟。最近EPO的非造血作用逐漸被認(rèn)識，目前已證實在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中也有EPO、EPO-R的基因表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)

2、EPO具有神經(jīng)保護(hù)、神經(jīng)營養(yǎng)及調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育的作用，因此受到廣泛關(guān)注，已成為諸多學(xué)者的研究熱點。重組人紅細(xì)胞生成素(rhEPO)是一種糖蛋白激素，作為重要的造血因子應(yīng)用于臨床已有20多年。但體外注射rhEPO在新生兒缺氧缺血性腦損傷(HIBD)中的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制仍不明確。本研究采用免疫組化、原位切口末端標(biāo)記、放射免疫以及血生化檢測的方法來研究在HIBD后腹腔注射rhEPO，海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞NR1蛋白的表達(dá)變化及神經(jīng)細(xì)胞凋亡，并測

3、定血漿及腦勻漿NO/ET的水平，從而探討rhEPO在HIBD中的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制，為進(jìn)一步探討HIE的發(fā)病機(jī)制及臨床治療提供理論依據(jù)。 目的:研究體外注射rhEPO對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后海馬CA1區(qū)NMDA受體Ⅰ型亞單位(NR1)表達(dá)的影響及海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化；檢測血漿中內(nèi)皮素，腦勻漿一氧化氮及一氧化氮合酶的表達(dá)，探討rhEPO的大腦保護(hù)作用的機(jī)制，從而尋求臨床治療HIE的新途徑。 方法: (1)動物模

4、型的制備：7日齡SD大鼠114只隨機(jī)分為3組：假手術(shù)(SO)組38只；缺氧缺血性腦損傷(HIBD)組38只；促紅細(xì)胞生成素治療(EPO)組38只。HIBD組與EPO組分別結(jié)扎右側(cè)頸總動脈。缺血術(shù)后恢復(fù)2h，置于2000ml常溫常壓缺氧艙內(nèi)，以1～2L·min-1的速度輸入含80mL·L-1氧氣和920mL·L-1氮氣的混合氣體，以氧濃度監(jiān)測儀檢測使氧濃度維持80mL·L-1，持續(xù)2h，建立HIBD的動物模型。EPO組于HI術(shù)后即刻腹腔注

5、射(i.p.)rhEPO5000IU/kg；假手術(shù)對照組僅游離而不結(jié)扎右側(cè)頸總動脈，不進(jìn)行缺氧處理。 (2)組織標(biāo)本的制備：三組新生大鼠分別于缺氧缺血后不同時間點斷頭處死新生大鼠，①取出腦組織于中性甲醛中固定12-24h制作石蠟切片；②測定各組新生鼠缺氧缺血(HI)后6h腦組織勻漿NO和NOS含量以及血漿中ET的水平。 (3)應(yīng)用蘇木素-伊紅染色觀察海馬區(qū)腦組織的病理形態(tài)；采用SP免疫組化染色研究NR1蛋白的表達(dá)；原位切

6、口末端標(biāo)記的方法檢測海馬區(qū)凋亡細(xì)胞；放射免疫法測定血漿內(nèi)皮素水平；生化檢測腦勻漿中一氧化氮及一氧化氮合酶的含量。(4)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，采用SPSS10.0軟件進(jìn)行方差分析及t檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論: 1.正常新生大鼠海馬區(qū)有極少量的凋亡細(xì)胞，HIBD后凋亡細(xì)胞明顯增多，而腹腔內(nèi)給予rhEPO后可通過抑制細(xì)胞凋亡而對HIBD后的腦組織起到保護(hù)作用。 2.正常新生大鼠海馬