植物黃酮類化合物槲皮素與轉(zhuǎn)錄因子AtMYB44誘導(dǎo)和調(diào)控植物防衛(wèi)反應(yīng)的研究.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文植物黃酮類化合物槲皮素與轉(zhuǎn)錄因子AtMYB44誘導(dǎo)和調(diào)控植物防衛(wèi)反應(yīng)的研究姓名：賈振華申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：董漢松201006植物黃酮類化合物槲皮素與轉(zhuǎn)錄因子AtMYB44誘導(dǎo)和調(diào)控植物防衛(wèi)反應(yīng)的研究44P2000：：44CDs：：GFP：：His、)，轉(zhuǎn)入擬毒3齊擬南齊突變體atmyb44，將44P2000：：44CDS：：舒尸引入突變體中，經(jīng)篩選鑒定后獲得純化的互補(bǔ)轉(zhuǎn)基因擬南芥

2、Catmyb44。過表達(dá)擬南芥35SM和44GFP、啟動子轉(zhuǎn)基因擬南芥44PGUS、互補(bǔ)擬南芥Catmyb44和突變體atmyb44純合體獲得為后續(xù)實驗準(zhǔn)備了實驗材料。2轉(zhuǎn)錄因子AtMYB44誘導(dǎo)表達(dá)及亞細(xì)胞定位轉(zhuǎn)錄因子是在脅迫反應(yīng)和生長發(fā)育中基因表達(dá)改變的重要調(diào)控因子。核定位信號區(qū)是使轉(zhuǎn)錄因子能夠進(jìn)入細(xì)胞核，從而調(diào)控下游基因的表達(dá)，最終決定生物表型。MYB家族就是一群能夠結(jié)合特定DNA序列的轉(zhuǎn)錄因子。AtMYB44基因可以被非生物脅迫

3、誘導(dǎo)增強(qiáng)表達(dá)，例如，創(chuàng)傷、冷脅迫、鹽脅迫和一些激素誘導(dǎo)，增強(qiáng)植物的抗逆反應(yīng)或植物發(fā)育生長。本實驗構(gòu)建了AtMYB44基因的原核表達(dá)工程茵EcoliBL21(pET30a：：AtMYB44)，并利用AtMⅦ44蛋白PAGE電泳條帶制備了AtMYB44蛋白的兔抗。我們利用AtumefaeiensEHAl05(pCAMBll301：：44[2000：：44CDS：：GFP：：His、)和AtumefaciensEHAl05(pBll21：：4

4、4：：GFP、萑淬意表良上對AtMYB44進(jìn)行了IIrpNEa蛋白和乙烯利(ACC)誘導(dǎo)表達(dá)和亞細(xì)胞定位，同時利用轉(zhuǎn)基因擬南芥Catmyb44和44GFP對AtMYB44進(jìn)行了亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果表明AtMYB44定位在細(xì)胞核內(nèi)，也驗證了44P2000的活性。而在HrpNEa蛋白和ACC誘導(dǎo)下，和對照相比，GFP能夠更強(qiáng)的表達(dá)。對44PGUS組織化學(xué)染色實驗分析表明，AtMYB44在擬南芥的各個組織中進(jìn)行表達(dá)，AtMYB44基因的RTP

5、CR也驗證了這一結(jié)果，而且發(fā)現(xiàn)SrpNEa和槲皮素能夠在擬南芥的各個組織中誘導(dǎo)AtMYB44基因表達(dá)。我們對Catmyb44的10個品系牙口35＆膨的5個品系進(jìn)行了AtMYB44基因誘導(dǎo)表達(dá)，篩選到最佳轉(zhuǎn)基因植物。這些結(jié)果暗示了AtMYB44基因能夠被一些生物或非生物脅迫誘導(dǎo)表達(dá)，而在植物體內(nèi)發(fā)揮其生物學(xué)功能。3轉(zhuǎn)錄因子AtMYB44在擬南芥中對Pseudomonassyringae抗病性的作用植物受病原菌侵染或用病原物激發(fā)子處理植物時

6、，植物激活的防衛(wèi)反應(yīng)中涉及大量基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。AtMYB44屬于擬南芥中R2R3MYB亞基22轉(zhuǎn)錄因子家族。大量的證據(jù)暗示植物R2R3MYB轉(zhuǎn)錄因子卷入到植物防衛(wèi)中，當(dāng)然防衛(wèi)反應(yīng)包括植物防御病染茵時宿主基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。我們分析了AtMYB44轉(zhuǎn)錄因子在擬南芥對PstDC3000基本防衛(wèi)中的作用。AtMYB44的TDNA插入突變體atmyb44接種PstDC3000后，與野生型相比，3d后葉片細(xì)菌數(shù)量增加，病害癥狀顯著加重，‘水楊酸調(diào)控的